ЙБЮМРНБШИ ЛЕДХЖХМЮ
Милон Лазер. Производство лазерной техники. Медицинские лазеры. А.В.Решетников, А.В.Карменян, О.Ю.Абакумова, Н.П.Неугодова, И.Д.Залевский, С.Е.Гончаров. Оценка биологической и противоопухолевой активности нового фотосенсибилизатора для клинического исследования-Радахлорина,0,35%-го раствора для внутривенного введения.
.B_w_trb {BORDER-RIGHT: #ffffff 1px solid; BORDER-TOP: #ffffff 1px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 0px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 1px solid; }
.B_w_tlb {BORDER-RIGHT: #ffffff 0px solid; BORDER-TOP: #ffffff 1px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 1px solid; }
.B_w_lb {BORDER-RIGHT: #ffffff 0px solid; BORDER-TOP: #ffffff 0px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 1px solid; }
.B_w_rb {BORDER-RIGHT: #ffffff 1px solid; BORDER-TOP: #ffffff 0px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 0px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 1px solid; }
.B_w_b {BORDER-RIGHT: #ffffff 0px solid; BORDER-TOP: #ffffff 0px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 0px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 1px solid; }
.BG_main {BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_05.jpg); BACKGROUND-REPEAT: repeat-x; }
.BG_main_b {BORDER-TOP-WIDTH: 1px; BORDER-LEFT-WIDTH: 1px; BORDER-LEFT-COLOR: #ffffff; BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_05.jpg); BORDER-BOTTOM-WIDTH: 0px; BORDER-BOTTOM-COLOR: black; BORDER-TOP-COLOR: #ffffff; BACKGROUND-REPEAT: repeat-x; BORDER-RIGHT-WIDTH: 0px; BORDER-RIGHT-COLOR: black; }
.menu_nav {PADDING-LEFT: 10px; FONT-SIZE: xx-small; BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_03.jpg); COLOR: #960000; BACKGROUND-REPEAT: no-repeat; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; }
.a_menu_gor {BORDER-RIGHT: black 0px ridge; BORDER-TOP: black 0px ridge; PADDING-LEFT: 10px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: x-small; MARGIN-LEFT: 10px; BORDER-LEFT: #d9d9d9 5px ridge; COLOR: #ffffff; BORDER-BOTTOM: black 0px ridge; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; TEXT-DECORATION: none; }
.a_menu_lang_over {PADDING-RIGHT: 5px; PADDING-LEFT: 5px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: xx-small; PADDING-BOTTOM: 2px; MARGIN: 3px; COLOR: #ffffff; PADDING-TOP: 2px; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; BACKGROUND-COLOR: #d70000; TEXT-DECORATION: none; }
.a_menu_lang {PADDING-RIGHT: 3px; PADDING-LEFT: 3px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: xx-small; PADDING-BOTTOM: 3px; MARGIN: 3px; COLOR: #ffffff; PADDING-TOP: 3px; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; TEXT-DECORATION: none; }
.BG_main_c {BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_02.jpg); BACKGROUND-REPEAT: no-repeat; }
.BG_main_txt {BORDER-RIGHT: #d6d6e0 1px dashed; PADDING-RIGHT: 10px; BORDER-TOP: black 0px dashed; PADDING-LEFT: 10px; FONT-SIZE: x-small; BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_04.jpg); PADDING-BOTTOM: 10px; BORDER-LEFT: black 0px dashed; WIDTH: 590px; PADDING-TOP: 10px; BORDER-BOTTOM: black 0px dashed; BACKGROUND-REPEAT: no-repeat; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; TEXT-ALIGN: justify; }
.BG_left {BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_left.jpg); BACKGROUND-REPEAT: no-repeat; }
.a_menu_left {PADDING-RIGHT: 1px; PADDING-LEFT: 3px; FONT-WEIGHT: normal; FONT-SIZE: x-small; BORDER-LEFT-COLOR: #d5d5d5; MARGIN-BOTTOM: 5px; BORDER-BOTTOM-COLOR: black; PADDING-BOTTOM: 3px; WIDTH: 140px; COLOR: #01052b; BORDER-TOP-COLOR: black; PADDING-TOP: 3px; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; HEIGHT: 24px; BACKGROUND-COLOR: #e7e9f5; TEXT-DECORATION: none; BORDER-RIGHT-COLOR: black; }
.B_w_tlr {BORDER-RIGHT: #ffffff 1px solid; BORDER-TOP: #ffffff 1px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 0px solid; }
.td_menu_left {BORDER-RIGHT: #d9d9d9 0px double; PADDING-RIGHT: 1px; BORDER-TOP: black 0px double; PADDING-LEFT: 1px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: x-small; MARGIN-BOTTOM: 5px; PADDING-BOTTOM: 3px; BORDER-LEFT: #d5d5d5 0px double; WIDTH: 100%; COLOR: #960000; PADDING-TOP: 3px; BORDER-BOTTOM: black 0px double; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; BACKGROUND-COLOR: #000099; TEXT-DECORATION: none; }
.B_w_l {BORDER-RIGHT: #ffffff 0px solid; BORDER-TOP: #ffffff 0px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 0px solid; }
.B_w_r {BORDER-RIGHT: #ffffff 1px solid; BORDER-TOP: #ffffff 0px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 0px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 0px solid; }
.BG_left_inv {BACKGROUND-POSITION: left bottom; BACKGROUND-IMAGE: url(images/bg_left_inv.gif); BACKGROUND-REPEAT: repeat-x; }
.td_right_line {BORDER-RIGHT: #d6d6e0 1px dashed; BORDER-TOP: black 0px dashed; FONT-SIZE: x-small; BORDER-LEFT: black 0px dashed; BORDER-BOTTOM: black 0px dashed; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; }
.B_w_t {BORDER-RIGHT: #ffffff 0px solid; BORDER-TOP: #ffffff 1px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 0px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 0px solid; }
.B_w_blr {BORDER-RIGHT: #ffffff 1px solid; BORDER-TOP: #ffffff 0px solid; BORDER-LEFT: #ffffff 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ffffff 1px solid; }
.td_copy {PADDING-LEFT: 10px; FONT-SIZE: xx-small; COLOR: #cb8080; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; TEXT-DECORATION: none; }
.td_address {PADDING-LEFT: 10px; FONT-SIZE: xx-small; COLOR: #960000; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; TEXT-DECORATION: none; }
H1 {FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: medium; COLOR: #960000; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; }
H2 {BORDER-RIGHT: black 0px solid; BORDER-TOP: black 0px solid; PADDING-LEFT: 10px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: small; BORDER-LEFT: #960000 10px solid; COLOR: #960000; BORDER-BOTTOM: black 0px solid; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; }
H3 {BORDER-RIGHT: black 0px solid; BORDER-TOP: black 0px solid; PADDING-LEFT: 10px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: x-small; PADDING-BOTTOM: 3px; BORDER-LEFT: #960000 5px solid; COLOR: #960000; BORDER-BOTTOM: #960000 1px solid; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; }
.b_r_all {BORDER-RIGHT: #960000 1px solid; BORDER-TOP: #960000 1px solid; BORDER-LEFT: #960000 1px solid; BORDER-BOTTOM: #960000 1px solid; }
.doclist_top {BORDER-RIGHT: black 0px solid; BORDER-TOP: #960000 1px solid; PADDING-LEFT: 10px; FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: x-small; BORDER-LEFT: black 0px solid; PADDING-TOP: 5px; BORDER-BOTTOM: black 0px solid; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; }
P {FONT-SIZE: x-small; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; }
.doclist_text {PADDING-LEFT: 10px; }
.input_oneline {BORDER-RIGHT: #960000 1px solid; BORDER-TOP: #960000 1px solid; FONT-SIZE: x-small; BORDER-LEFT: #960000 1px solid; WIDTH: 100%; COLOR: #960000; BORDER-BOTTOM: #960000 1px solid; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; BACKGROUND-COLOR: #f9eeee; }
.input_radio {FONT-SIZE: x-small; WIDTH: 100%; COLOR: #960000; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; BACKGROUND-COLOR: #f9eeee; }
.text_main {FONT-SIZE: x-small; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; }
.input_check {BORDER-RIGHT: #960000 1px solid; BORDER-TOP: #960000 1px solid; FONT-SIZE: x-small; BORDER-LEFT: #960000 1px solid; COLOR: #960000; BORDER-BOTTOM: #960000 1px solid; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; BACKGROUND-COLOR: #f9eeee; }
.b_r_bot_dotted {BORDER-RIGHT: #c7cbe8 0px solid; BORDER-TOP: #c7cbe8 0px solid; BORDER-LEFT: #c7cbe8 0px solid; BORDER-BOTTOM: #d5d5d5 1px solid; }
.input_bottom {BORDER-RIGHT: #960000 1px solid; BORDER-TOP: #960000 1px solid; FONT-SIZE: x-small; BORDER-LEFT: #960000 1px solid; COLOR: #960000; BORDER-BOTTOM: #960000 1px solid; FONT-FAMILY: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; BACKGROUND-COLOR: #f9eeee; }
.mynewstyle {font-family:arial;font-size:18px; }
.smallsmall {{font-family:arial;font-size:6px;} }
.justify {TEXT-ALIGN: justify; }
.vvs {font-family:Arial;font-size:10px; }
.moron {FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: x-small; COLOR: #960000; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; }
.nodecor {TEXT-DECORATION: none;COLOR: #000000; }
.nodecor1 {TEXT-DECORATION: none; }
.moron1 {FONT-WEIGHT: bold; FONT-SIZE: xx-small; COLOR: #960000; FONT-FAMILY: Arial, Helvetica, sans-serif; }
русский english
О компанииПродукцияСсылкиКонтактыНовости
www.milon.ru > Продукция > Медицинские лазерные аппараты > Публикации > Фотодинамическая терапия > А.В.Решетников, А.В.Карменян, О.Ю.Абакумова, Н.П.Неугодова, И.Д.Залевский, С.Е.Гончаров. Оценка биологической и противоопухолевой активности нового фотосенсибилизатора для клинического исследования-Радахлорина,0,35%-го раствора для внутривенного введения.
Е.Н.Пыхтеева, З.М.Ашуров, В.Г.Зенгер, В.М.Исаев, А.Н.Наседкин, А.И.Слоева, А.В.Решетников, О.С.Хамукова, И.Д.Залевский, С.Е.Гончаров, Е.Ф.Странадко, Д.М.Мустафаев, О.О.Копченко, Фотодинамическая терапия в ЛОР - практике.
А.В.Решетников, И.Д.Залевский, С.Е.Гончаров и др. Способ фотодинамического лечения острого и хронического гнойного гайморита.
А.В.Решетников. Фотосенсибилизаторы в современной клинической практике (обзор).
В.М.Исаев, В.Г.Зенгер, А.Н,Наседкин, З.М.Ашуров, А.В.Решетников. Фотодинамическая терапия при хронических гнойных гайморитах.
И.Д.Залевский. Перспективы использования в стоматологии методов силовой лазерной терапии.
О.Н.Рисованная. Бактериотоксическая терапия при лечении воспалительных заболеваний тканей пародонта.
Н.А.Маркичев, В.И.Елисеенко, Ю.В.Алексеев, А.А.Армичев. Фотодинамическая терапия базальноклеточного рака кожи с применением фотосенсибилизатора хлоринового ряда.
Е.В.Кочнева, В.А.Привалов. Фотодинамическая терапия в онкологической практике. Челябинская государственная медицинская академия, кафедра общей хирургии. Межвузовский медикофизический центр.
А.В.Решетников, А.В.Карменян, О.Ю.Абакумова, Н.П.Неугодова, И.Д.Залевский, С.Е.Гончаров. Оценка биологической и противоопухолевой активности нового фотосенсибилизатора для клинического исследования-Радахлорина,0,35%-го раствора для внутривенного введения.
Е.Ф.Странадко, И.Д. Залевский, М.В.Рябов, Н.Н. Волкова. Лазерные установки для ФДТ с производным хлорина Е6.Государственный Научный Центр лазерной медицины МЗ РФ Москва, Россия
В.В.Волков. Лазерное лечение внутриглазной меланомы. Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург
Е.Ф.Странадко, В.М.Мешков, М.В.Рябов. Изучение эффективности фотодинамической терапии с новым фотосенсибилизатором фотодитазином-производным хлорина Е6.
А.В.Решетников, А.В.Карменян, О.Ю.Абакумова, Н.П.Неугодова, И.Д.Залевский, С.Е.Гончаров. Оценка биологической и противоопухолевой активности нового фотосенсибилизатора для клинического исследования-Радахлорина,0,35%-го раствора для внутривенного введения.Untitled DocumentВ сб. 'Использование лазеров для диагностики и лечения заболеваний. Научно-информационный сборник' (приложение к бюллетеню 'Лазер-информ'), в печатиА.В.Решетников1, А.В.Карменян2, О.Ю.Абакумова3, Н.П.Неугодова4, И.Д.Залевский1,5,6, С.Е.Гончаров61ООО 'РАДА-ФАРМА', г.Москва 2НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН, г.Москва; 3НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича РАМН, г.Москва; 4Институт стандартизации лекарственных средств, г.Москва; 5ООО 'КВАЛИТЕК', г.Москва; 6ООО 'МИЛОН ЛАЗЕР', г. Санкт-Петербург;1. ВведениеВ настоящее время тетрапиррольные соединения (например, порфирины и производные ряда хлорофилла) вызывают большой интерес как фотосенсибилизаторы (ФС) для применения в терапии злокачественных новообразований. В течение последнего десятилетия сформировалось соответствующее направление в химиотерапии опухолей, именуемое фотодинамической терапией (ФДТ) опухолей, состоящее последовательно из системного или местного введения ФС и лазерного облучения опухоли на длине волны, соответствующей одному из максимумов поглощения ФС (как правило, длинноволновому). Одной из проблем такого подхода является повышение селективности накопления ФС в опухоли [1], так как следствием низкой селективности является невысокая эффективность лечения и повышенная чувствительность кожи к дневному свету.С целью повышения селективности используются такие приемы, как: cтруктурно-функциональный подход к синтезу ФС с заданными свойствами [2,3]; ковалентное присоединение ФС к моноклональным антителам против опухолеассоциированных антигенов [4,5]; образование нековалентных комплексов ФС с липопротеинами [6]; использование ФС в виде липосомных препаратов [7,8]; доставка ФС с помощью векторов, способных избирательно связываться с клеточными органеллами раковых клеток [8,9].При синтезе тетрапирролов наблюдается тенденция к созданию соединений с заданными свойствами на основании структурно-функциональных свойств [10]. Это применимо, в частности, к конструированию и получению новых ФС для ФДТ, характеризующихся повышенной туморотропностью и обладающих высокой цитофототоксичностью по отношению к опухолевым клеткам после облучения [11-14]. В результате анализа большого объема экспериментальных и клинических материалов были сформулированы основные требования к оптимальному ФС, включающие биологические (токсические и фармакокинетические), фотофизические и химико-технологические критерии [1]. Прежде всего это:доступность получения или синтеза, однородный химический состав; хорошая растворимость в воде или разрешенных для внутривенного введения жидкостях и кровезаменителях; стабильность при действии света и хранении; оптимум между величинами квантового выхода флюоресценции (способность ФС флюоресцировать обусловливает его диагностические возможности и облегчает контроль накопления и выведения его из тканей) и квантового выхода интерконверсии (определяет способность ФС к генерации синглетного кислорода); высокая селективность накопления в тканях злокачественных новообразований; быстрое выведение фотосенсибилизатора из кожи и эпителиальной ткани; низкая темновая и световая токсичность в терапевтических дозах; сильное поглощение в спектральном диапазоне, где биологические ткани имеют наибольшее пропускание (красный и ближний ИК диапазоны); высокий квантовый выход образования синглетного кислорода в условиях in vivo.Основное ограничение метода ФДТ - глубина действия лазерного излучения. Используемые в клинике препараты имеют спектр фотодинамического воздействия с максимумами в области 620 - 690 нм. Проницаемость биологических тканей в этом диапазоне незначительна и составляет несколько миллиметров. Известно, что максимальная проницаемость тканей находится в дальней красной и ближней ИК области 750 - 1500 нм и соответствует диапазону генерации эффективных, надежно работающих и доступных лазеров. Поэтому актуально создание и внедрение ФС, обеспечивающих эффективную генерацию синглетного кислорода в этой области спектра и увеличивающих возможности ФДТ. В настоящее время проводится направленный поиск таких ФС среди производных хлоринов, бактериохлоринов, пурпуринов, бензопорфиринов, тексафиринов, этиопурпуринов, нафтало- и фталоцианинов [15]. При этом особый интерес представляют ФС, обладающие способностью не только быстро накапливаться в опухолях, но и с высокой скоростью распадаться. Со временем, как это принято в химиотерапии опухолей, будет создан банк ФД препаратов адресного спектра применения, адаптированных к определенным нозологическим и гистологическим формам рака. Впервые водорастворимые производные хлорофилла предложил использовать для медицинских целей Э.Снайдер (США) в 1942 г [16]. При пероральном или внутривенном применении хлориновых смесей, в основном содержащих хлорин р6 1: (R1=Vi, R2=COOH, R3 =COOH, R4=COOH) (Рис.1а), были отмечены низкая токсичность, гипотензивное, антисклеротическое, спазмолитическое, обезболивающее, противоревматоидное действие. При пероральном применении в дозах 1 г в день в течение 30 дней улучшались показатели биохимии крови, в частности, в 1,5-2 раза снижался уровень холестерина в крови. Это послужило показанием к использованию водорастворимых хлоринов для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, атеросклероза, ревматоидного артрита [17]. Первое упоминание об использовании производных хлоринового ряда для ФДТ касается производных феофорбида а 2: (R1=Vi, R2=COOH, R3=COOMe) (Рис.1б), которые относятся к хлоринам. Некоторые из них были запатентованы в качестве потенциальных ФС для ФДТ в 1984 г . в Японии (И.Саката и сотр.) [18]. В научной литературе об использовании производных хлоринового ряда для ФДТ было заявлено в 1986 г . [19], когда группа авторов из США (Дж.Боммер, Ж.Швейда и Б.Бирнхем), исходя из оценки перспективности свойств хлорина е61: (R1=Vi, R2=COOH, R3=CH2COOH, R4=COOH), сообщила о результататах своего поиска ФС, удовлетворяющего важнейшим требованиям ФДТ, а именно хорошей туморотропности и интенсивному поглощению в длинноволновой красной области спектра. Выбор был остановлен на моно-L-аспартил хлорине е6(МАСЕ) 1: (R1=Vi, R2=COAsp, R2=CH2COOH, R4=COOH), который в настоящий момент находится на завершающей стадии клинических испытаний в Японии. Одновременно в США Дж.Боммером и Б.Бирнхемом для японской компании Nippon Petrochemicals Company был заявлен для патентования ряд функционализированных производных хлорина е6 и бактериофеофорбида а 3: ( R=COOH) (Рис.1в) как ФС для ФДТ [20].Рис.1. Структурные формулы типичных ФС хлоринового ряда.2. Химические свойства 'Радахлорина, 0,35%-ного раствора для внутривенного введения' ('Радахлорина').Нами проводятся систематические исследования тетрапиррольных макроциклов хлоринового ряда (производных хлорофилла а ) с целью выявления структурно-функциональных закономерностей накопления фотосенсибилизаторов в опухоли, повышения терапевтического отношения, создания на их основе лекарственных субстанций и форм, их всестороннего доклинического изучения и последующего внедрения лучших соединений в клиническую практику ФДТ [ 3,10,21]. Одним из результатов данного поиска является 'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' [22]. 'Радахлорин' содержит композицию из трех циклических тетрапирролов хлориновой природы (с гидрированным кольцом D), основной из которых (80-90%) - хлорин е61: (R 1 =Vi, R2=COOH, R3=CH2COOH, R4=COOH). В дополнение к нему имеется ФС, обладающий способностью с высокой избирательностью накапливаться в неопластических образованиях и абсцессах, а также возможен примесный компонент (<5%) (Рис.2).Рис. 2. Структурная формула одного из двух главных компонентов 'Радахлорина' -хлорина е6.3. Фотофизические свойства 'Радахлорина, 0,35%-ного раствора для внутривенного введения'.ФС обладают способностью поглощать свет в видимой области, результатом чего является их фотоактивация и последующая релаксация возбужденного состояния с переносом энергии на растворенный в тканях молекулярный кислород и органические субстраты. Последнее приводит к окислительным и свободно-радикальным процессам в биологических тканях и их повреждению и последующему разрушению (некрозу). Наиболее предпочтительной для ФДТ полосой возбуждения является самая длинноволновая полоса поглощения конкретного ФС (Табл.1, Рис.3), т.к. с ростом длины волны растет проникающая способность света в биологические ткани. В первую очередь для соединений с предполагаемой биологической активностью нами исследуются их фотофизические свойства в различных средах.Табл. 1. Положения максимумов поглощения и величины молекулярной экстинкции поглощения для длинноволновой полосы 'Радахлорина, 0,35%-ного раствора для внутривенного введения' в различных средах.Табл. 2. Спектрально-люминесцентные свойства 'Радахлорина, 0,35%-ного раствора для внутривенного введения' в различных средах.'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' способен разрушать биологические объекты после возбуждения светом с длиной волны 654-670 нм, что соответствует эффективной глубине проникновения света в ткани до 7 мм . Высокая степень фототоксичности 'Радахлорина' связана с высоким квантовым выходом интерконверсии (Табл.2), что коррелирует с высоким квантовым выходом синглетного кислорода - одного из основных токсических агентов, высвобождаемых под действием света при ФДТ [23]. Сохраняющаяся при этом способность препарата флюоресцировать оставляет возможность для фотодинамической диагностики очагов неопластического изменения тканей. Для этого препарат возбуждают в любую из полос - 406, 506, 536, 608 или 662 нм и регистрируют интенсивную флюоресценцию при 668 нм.Рис. 3. Спектры поглощения препарата 'Радахлорин' в сравнении с препаратами 'Фотосенс' и 'Фотогем'.В опытах по изучению фотодинамической активности РХ использовался полупроводниковый лазерный диодный модуль для фотодинамической терапии 'ЛАХТА-МИЛОН' , разработанный и запатентованный ООО 'МИЛОН ЛАЗЕР' совместно с ООО 'РАДА-ФАРМА' [24] и производимый компанией 'Квалитек', Москва. Аппарат 'ЛАХТА-МИЛОН' - лазерный прибор нового поколения - является результатом развития лазерной медицинской аппаратуры в области повышения надежности, миниатюризации, расширения пользовательского интерфейса и увеличения количества используемых длин волн. Прибор предназначен для использования в фотодинамической терапии, лазерной гипертермии, лазерной хирургии. Лазер может осуществлять следующие виды воздействия на ткань: фoтохимическое (с применением фотосенсибилизатора), фотохимическое (без применения фотосенсибилизатора - длина волны 1260 нм), нагрев (термотерапия и гипертермия), вапоризация, коагуляция, иссечение тканей (контактное и бесконтактное).ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА: • тип излучателя - матрица дискретных лазерных диодов • широкий ассортимент возможных длин волн: 635,662,670,690,798,808,920,960,975,1060,1260,1300,1470,1530,1750 нм • один или два независимых лазерных канала • полная совместимость со стандартными световодами и лазерным инструментом • диаметр световедущей жилы 200мкм и более (стандартно) и 100мкм (опционно) • наличие прицельного лазера в каждом канале • импульсный и непрерывный режим • современное микропроцессорное управление • большой графичесий дисплей • цифровая индикация и регулировка мощности, энергии, длительности импульса и интервала, времени экспозиции, яркости прицела • счетчик импульсов • максимальная мощность от 1 Вт до 20 Вт в зависимости от длины волны • малые габариты (170х200х280 мм) и вес ( 6,5 кг )4. Результаты биологических испытаний. 4.1. Исследование цитотоксичности и цитофототоксичности in vitro.При дальнейшем определении пригодности соединения для использования в качестве эффективного ФС для ФДТ измеряется его коэффициент распределения в системе октанол/буферный раствор, а также оцениваются цитотоксичность и цитофототоксичность в опытах in vitro (Табл.3). Исследование цитотоксической ('темновой') и цитофототоксической активности проводилось в культурах клеток феохромоцитомы крысы (РС12), нвриномы гассерова узла крысы ( NGUK 1) и гепатомы крысы ( Hep 27) при использовании 3-х независимых методов оценки - МТТ-теста, окрашивания клеточного монослоя кристалл-виолетом и по включению в ДНК С13 -тимидина. Препаратом сравнения служил препарат 'Фотосенс' (ГНЦ РФ НИОПИК). Экспозиционная доза облучения лазером 'ЛАХТА-МИЛОН' составляла 50 Дж/см2. Согласно литературным данным [2,25], наибольшую эффективность в качестве ФС для ФДТ проявляют амфифильные соединения, для которых коэффициент распределения в системе 1-октанол/фосфатный буфер с pH 7.4 (Kp) больше 1. Для 'Радахлорина' этот показатель составляет 1,4 (Табл.2), что является признаком перспективности дальнейшего изучения свойств этого соединения. Представленные в Табл.3 полученные при определении цитотоксичности данные позволяют предположить, что в отсутствии облучения лазером для 'Радахлорина' в небольшой степени, а 'Фотосенса' - в значительной - характерно проявление цитотоксической активности. При облучении лазером клеточной культуры, инкубированной с ФС, наступает гибель клеток. Цитофототоксичность соединений принято оценивать по величине концентрации в микромолях ( μM ) препарата, при которой погибает 50% всех клеток (ЕС50). В приведенном здесь примере ФС по эффективности распределяются следующим образом: 'Радахлорин'≥'Фотосенс'. Что касается абсолютных значений, то ФС с цитофототоксичностью менее 20 μM считаются эффективными [2].Табл. 3. Коэффициент липофильности и активность in vitro в культуре клеток РС 12 [26].4.2.Острая токсичность и пирогенность in vivo.Обнадеживающие результаты по цитофототоксичности способствовали дальнейшему изучению токсичности и пирогенности 'Радахлорина' в опытах in vivo . Исследование токсичности проводили на мышах, а пирогенности - на кроликах (Табл.4).'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' один раз вводили внутривенно. При изучении острой токсичности проводили наблюдение за животными, оценивали сроки гибели, число павших животных, клиническую картину интоксикации, поведенческие реакции и макроскопическое состояние внутренних органов павших животных. LD50 расчитывали с помощью метода пробит-анализа. Полученные результаты позволяют отнести 'Радахлорин' к классу соединений 'малотоксичные', для которых LD50 находится в диапазоне 101-1000 мг/кг. При испытании на пирогенность установлено, что в тест-дозе 0,7 мг ФС на кг массы тела кролика 'Радахлорин' апирогенен. Эта тест-доза соответствует общепринятым дозам для определения пирогенности - 1/20 от терапевтической дозы для человека.Табл.4. Острая токсичность и пирогенность 'Радахлорина' in vivo. 4.3. Фармакокинетика.При введении препарата 'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' внутрибрюшинно мышам с перевитой в мышцу задней ноги эмбриокарциномой Т36 в дозе 40 мг/кг наблюдаются следующие закономерности в его распределении. После введения препарат попадает в печень, а затем в кровь, после чего он перераспределяется в органы и ткани животных (Табл.5). При внутривенном введении препарата были получены аналогичные закономерности биораспределения. Максимум накопления субстанции в опухоли (0,70 μM) достигается через 5 часов после внутрибрюшинного введения в дозе 40 мг/кг и длительное сохраненяется (18-24 часа). Опухолевая концентрация субстанции через 18 ч после введения препарата составляет 0,48 μM, что всего в 1,5 раза меньше, чем в абсолютном максимуме накопления, при высокой селективности накопления. Отношение опухоль/мышечная ткань составляет через 18 часов - 32, а опухоль/кожа - 44. После внутривенного введения препарата в дозе 20 мг/кг максимум накопления в опухоли регистрируется через 0,5 часа (0,32 μM) и также длительно сохраняется (до 5 часов). Максимальная контрастность накопления при внутривенном введении проявляется через 3 часа и составляет для опухоли/мышечной ткани - 3, а опухоли/кожи - 4. Препарат выводится из организма через сутки на 98%.5. Фотодинамическая терапия.Изучение фотодинамической активности препарата 'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' было проведено на мышах линии Balb/c с перевитой в мышцу задней лапы эмбриокарциномой Т36. Вес мышей - 20-21 грамма. Процедуру облучения проводили диодным лазером 'ЛАХТА-МИЛОН' через 2 недели после перевивки опухоли. Перед началом облучения была проведена предварительная депиляция кожи в области облучения. Соединение вводили внутрибрюшинно в дозе 40 мг/кг веса, что соответствует достаточной терапевтической дозе. Для проведения процедуры облучения мыши вводились в эфирный наркоз. Вес опухолей в контрольной и опытной группе в момент эксперимента варьировал от 0.9 до 1 грамма. Облучение проводили через 5-6 часов после введения ФС. Каждое животное, за исключением контрольных, подвергалось однократной процедуре облучения, затем проводились наблюдения в течение месяца после проведённого воздействия, регистрируя площадь некроза опухолей и общее физиологическое состояние. Средняя плотность экспозиционной дозы облучения составляла 150 или 300 Дж/см2. Наилучшие результаты в виде полного некроза опухоли, образования корочки через 1 неделю после ФДТ и ее отпадания через 1,5 мес после ФДТ наблюдались в группе, получившей световую дозу 300 Дж/см2. Полученные результаты позволяют констатировать факт наличия выраженной фотодинамической активности данного соединения в экспериментах in vivo на мышах.Табл. 5. Главные фармакокинетические показатели.Выводы.Хлориновые тетрапиррольные фотосенсибилизаторы обладают интенсивной полосой поглощения в длинноволновой области, оптимальным соотношением флюоресценция/интерконверсия и проявляют на порядок большую световую токсичность, чем большинство ФС, при отсутствии темновой токсичности. Общие токсические свойства при введении хлориновых ФС в организм оказываются лучше, чем у порфириновых олигомеров или сульфированных фталоцианинов, а скорости выведения препаратов из организма не сравнимы: 'Фотосенс' и 'Фотогем' сохраняются в организме на период более трёх месяцев против 2-х суток у водорастворимых хлориновых ФС. Осуществляемый нами структурно-функциональный поиск позволяет получать фотосенсибилизаторы с хорошими фотофизическими, биологическими характеристиками и высокой специфической активностью, что создает возможность для получения ФС, наделенного комплексом оптимальных для ФДТ свойств. Препарат 'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' обладает рядом преимуществ по отношению к другим препаратам для ФДТ:достижение высокого (0,70 μM) максимума накопления в опухоли через 5 часов после внутрибрюшинного введения в дозе 40 мг/кг и длительное его сохранение (18-24 часа). Опухолевая концентрация через 18 ч после введения составляет 0,48 μM, что всего в 1,5 раза меньше, чем в абсолютном максимуме накопления, при исключительно высокой селективности накопления. Отношение опухоль/мышечная ткань через 18 часов составляет 32, а опухоль/кожа - 44; достижение высокого (0,32 μM) максимума накопления в опухоли через 0,5 часа после внутривенного введения в дозе 20 мг/кг и длительное его сохранение (до 5 часов). Максимальная контрастность накопления при внутривенном введении проявляется через 3 часа и составляет для опухоли/мышечной ткани 3, а опухоли/кожи - 4; быстрое выведение препарата из организма: через сутки - 98%; высокая фотодинамическая активность препарата in vivo при низкой цитотоксичности.В результате проведения ФДТ с 'Радахлорином, 0,35%-ным раствором для внутривенного введения' получено увеличение средней продолжительности жизни в опытной группе животных, облученной лазерным излучением 300 Дж/см2 почти в 2 раза при выраженной деструкции опухолей. Этот результат был во многом достигнут благодаря рабочим характеристикам лазера 'ЛАХТА-МИЛОН'. Свойства 'Радахлорина' позволяют радикально изменить саму технологию ФДТ в онкологической клинике, поскольку можно исключить этап продолжительного стационарного лечения, необходимый при использовании 'Фотофрина-II', 'Фотогема' или 'Фотосенса', заменив его однодневным стационаром или даже амбулаторным лечением. Оптимальным временем для облучения опухолей лазерным излучением в клинике можно считать 3-часовую точку (при внутривенном введении). Лекарственная субстанция 'Жидкий экстракт хлоринов, 7%' разрешена для промышленного выпуска и медицинского применения [27]. Две лекарственные формы - 'Радахлорин, 0,35%-ный раствор для внутривенного введения' и 'Радахлорин, 0,1%-ный гель для наружного применения' уже прошли серию клинических испытаний в онкологии [28].Список использованной литературы.Иванов А.В. // Медицинская физика. 1996 . Т . 3. С . 55-60. Boyle R.W., Dolphin D. // Photochem. Photobiol.- 1996. - V.64. - N3. - p.469-485. А . В . Решетников , А . В . Иванов , О . ЙБЮМРНБШИ ЛЕДХЖХМЮ . Абакумова , А . Т . Градюшко , И . Д . Залевский , А . В . Карменян , В . П . Лаптев , Н . П . Неугодова . // В сб . 'Использование лазеров для диагностики и лечения заболеваний. Научно-информационный сборник' (приложение к бюллетеню 'Лазер-информ'), 2001 , вып. 3, 34-40. Yarmush M.L., Thorpe W.P., Strong L., Rakestraw S., Toner M., Tompkins R. // Crit. Rev. Therap. Drug Carr. Syst. 1993 . V. 10. N 3. Р . 197-252. Klyashchitsky B.A., Nechaeva I.S., Ponomarev G.V. // J. of Controlled Release. 1994 . V. 29. Р . 1-16. Dagan A., Gatt S., Cerbu-Karabat S., Maziere J.-K., Maziere C., Santus R., Engelhardt E.L., Yeh K.A., Stobbe C.C., Fenning M.C., Chapman J.D. // Int. J. Cancer. 1995 . V. 63. Р . 831-839. Yemul S., Berger C., Estabrook A., Suarez S., Edelson R., Bayley H. // Pros. Natl. Acad. Sc. USA. 1987 . V. 84. Р . 246. Bergstrom L.C., Vucenik I. , Hagen I.K., Chernomorsky S.A., Poretz R.D. // J. Photochem. Photobiol. B-Biol. 1994 . V. 24. N 1. Р . 17-23. Akhlynina T.V., Jans D.A., Rozenkranz A.A., Statsyuk N.V., Balashova I.Y., Toth G., Pavo I., Rubin A.B., Sobolev A.S. // J. Biol. Chem. 1997 . V. 272. N 33. Р. 20328-20331. Иванов А.В., Решетников А.В., Дмитриев А.А., Градюшко А.Т., Швец В.И., Пономарев Г.В. // Материалы второго съезда фотобиологов России . Пущино . 8-12 июня 1998 . С . 362-364. Pandey R.K., Shiau F.-Y., Sumlin A.B., Dougherty T.J., Smith K.M . // Bioorg. and Med. Chem. Lett. - 1992 . - Vol.2/5. - P.491-496. Pandey R.K., Shiau F.-Y., Smith N.W., Dougherty T.J., Smith K.M. // Tetrahedron . - 1992 . - Vol.48. - N36. - P.7591-7600. Jiang X., Pandey R.K., Smith K.M. // Tetrahedron Lett .- 1995 . - Vol.36. - N3. - P.365-368. Jiang X., Pandey R.K., Smith K.M. // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. - 1996 . - P .1607-1615. Решетников А.В., Швец В.И., Пономарев Г.В. // в кн. Успехи химии порфиринов. - СПб: НИИ Химии СПбГУ. - 1999 . - Т. 2. - Гл.4. - С. 70-114. Pat. 2,274,101 (02/ 1942 ) USA / E.G.Snyder. Preparation of chlorin e. Pat. 3,102,891 (09/ 1963 ) USA / E.A.Allen. New porphyrinic and chlorophyllic compositions and process therefor. Pat. 4,709,022 (11/ 1987 ) USA / Sakata I. , Nakajima S., et.al. Pheophorbide Derivatives and Alkaline Salts Thereof. // C.A. - 1985 . - V.103. - N15. - 123271s. Bommer J.C., Sveida Z.J., Burnham B.F. Further studies on the relationship between tetrapyrrole structure and usefulness as photosensitizers. // Proc. 1st Int. Conf. Clinical Applications of Photosensitization for Diagnosis and Treatment. - 1986 . - p.129. Pat. 4,656,186 (04/ 1987 ) USA / Bommer J.C., Burnham B.F. Tetrapyrrol Therapeutic Agents. // C.A. - 1987 . - V.106. - N11. - 85048b. Ivanov A.V., Reshetnickov A.V., Shvets V.I., Ponomarev G.V. // Abstracts of 7th International Conference 'Laser Applications in Life Sciences'. - Bratislava , Slovak Republic . - 24-28 August, 1998 . Решетников А.В., Залевский И.Д., Кемов Ю.В. и соавт. Фотосенсибилизатор и способ его получения . // Патент РФ ?2183956. Положительное решение от 21 декабря 2001 г . по заявке ? 2001108397 от 30 марта 2001 г . A.T.Gradyushko, A.N.Sevchenko, K.N.Solovyov and M.P.Tsvirko. // Photochem. Photobiol., 1970 , 11, 387-400. Регистрационное удостоверение ?29/01050603/5828-03 от 19.12.2003 на изделие медицинской техники 'Аппарат лазерный хирургический фотодинамического и гипертермического режимов воздействия программируемый 'ЛАХТА-МИЛОН'. Решетников А.В., Жигальцев И.В., Коломейчук С.Н., Каплун А.П., Швец В.И., Жукова О.С., Карменян А.В., Иванов А.В., Пономарев Г.В. // Биоорганическая химия. - 1999 . - ?10. - c .782-790. A.V.Reshetnickov, S. Spaniol, N.P.Neugodova, G.A.Sapozhnikova, O.Yu.Abakumova, T.A.Tsvetkova, I.D.Zalevsky, S.E.Goncharov, A.V.Karmenyan, G.V.Ponomarev. // Abstracts of EBiOS 2000: EOS/SPIE/ELA European Biomedical Optics Week. - Amsterdam , 4-8 August 2000 . - p.43 (full paper submitted). Рег. номер Р ?001580/01-2002 от 26.07.2002 'Радахлорин' R , раствор для внутривенного введения, 0,35% 10 мл. Разрешения на проведение клинических испытаний МЗ РФ ? 120 от 04.07.02 и ?221 от 18.08.03. Успешно прошел первую (июль 2002 - март 2003) и вторую (август - декабрь 2003) фазы клинических исследований по протоколу лечения базально-клеточного рака кожи. 'Радахлорин' R , гель для наружного применения, 0,1% 25 г . Разрешения на проведение клинических испытаний МЗ РФ ? 120 от 04.07.02 и ?220 от 18.08.03. Успешно прошел первую (июль 2002 - декабрь 2003) и вторую (август - декабрь 2003) фазы клинических исследований по протоколу лечения базально-клеточного рака кожи. Оба препарата рекомендованы Фармакологическим комитетом Минздравсоцразвития РФ (протокол ?10 от 09.06.2005) к широкому медицинскому применению для лечения рака кожи.Группа компаний МИЛОН: Санкт-Петербург, тел.: +7(812) 970-09-00; Москва, тел.: +7(495) 585-84-93,тел./факс: +7(495) 725-78-86
©1992 - 2008 МИЛОН ЛАЗЕР. Все права защищены. Медицинские Лазеры.
ПЮГДЕКШ
НФХПЕМХЕ
УНКНДХКЭМШИ ЙЮЛЕПЮ
summer ЙСУНММШИ
ЛХЯРЕП АХМ
БЮГЮ 2111
ЙСОХРЭ АСЙЛЕЙЕПЯЙХИ КХМХЪ
ЯХКХЙНМ
dunlup 205 55 r16
ЛПР ЙНКЕММШИ ЯСЯРЮБ
ОПЮИЯ ГЕПЙЮКН
ЯНГДЮМХЕ КНЦН
ВЕПМШИ ЙНТЕ
ЯПНВМШИ ОЕПЕБНД
АЮУХКЮ ОПНХГБНДХРЕКЭ
ЙЮОЯСКЮ ЛХЮНГХ
restart ОКХРЮ
АСЙЛЕЙЕПЯЙХИ ЙНМРНПЮ ТЮБНПХР
ЛЕФДСМЮПНДМШИ ЙНМЙСПЯ ДЕАЧРЮМР
ЮМЙЕРХПНБЮМХЕ
НАПЕГЮМХЕ
renu multiplus 355ЛК
СОПЮБКЕМХЕ ЮПУЮМЦЕКЭЯЙ
ЙЮКХАПНБЙЮ ЖБЕР
ЙСОКЪ ОПНХГБНДЯРБЕММШИ ЙНЛОКЕЙЯ
БЮПНВМШИ ОНБЕПУМНЯРЭ cata
nokia 3230 ЙСОХРЭ
rittal
СГХ ЯДЕКЮРЭ
РЕКЕТНММШИ ЮМЙЕРХПНБЮМХЕ
ЙНМЙСПЕМРМШИ ЯРПЮРЕЦХЪ
ЯАНПМШИ ДНЯРЮБЙЮ
БХРПХМЮ ЛНПНФЕМШИ
ЙБМ ЯЗЕЛЙЮ
НОЕПЮРНПЯЙХИ ЖЕМРП
ЮКЕЙЯЮМДП БЕПРХМЯЙХИ. ФЕКРШИ РЮМЦН
ПЮДХНДНЯРСО
ЙСОХРЭ ЙНМДЕМЯЮРННРБНД
ОЮПЙЕРМШИ КЮЙ
ЯЕМЯНПМШИ ЩЙПЮМ
ЯЕПБХЯ ЮКЭТЮ КЮБЮКЭ
ЖБЕР КЮЛХМЮРЮ ЙКЮЯЯ 32
ДКХММШИ МЮПД
ПЮЯЯШКЙЮ
ziplock
ОПЕПШБЮМХЕ АЕПЕЛЕММНЯРЭ
БХМХКНБШИ ДХПХФЮАКЭ
БМЕЬМХИ ЮМРЕММЮ
АЕМГНОХКЮ ХЛОНПРМШИ
ЯХЯРЕЛЮ ДШЛНСДЮКЕМХЪ
СЦКНБНИ РЕЯРНЛЕЯХРЕКХ
iridium motorola
ОНДАНП УНКНДХКЭМШИ ЙЮЛЕПЮ
ЙЮИР ОХКНРЮФМШИ
ГЮЫХРМШИ ЙПЮЯЙЮ
ЯЙПЮА-ОХКХМЦ
dect desktop
ЖЕМРПЮКЭМШИ ДЕРЯЙХИ ЛХП
ЙПЮМНБШИ РЕКЕФЙЮ
intex
ОНДЬХОМХЙНБШИ СГЕК
ОПНРЕХМ
БНЯЯРЮМНБКЕМХЕ ХМТНПЛЮЖХЪ
ЙЮКХАПНБЙЮ ЖБЕР
РЕКЕТНММШИ ЮМЙЕРХПНБЮМХЕ
ЦПСМР
МЮПД ЯЙЮВЮРЭ
УНКНДХКЭМХЙ НОРНЛ
ЮПУШГ
БЮГЮ 2115
ОПНБЕДЕМХЕ ЮМЙЕРХПНБЮМХЕ
РПЕУЛЕПМШИ ОПЕГЕМРЮЖХЪ
УНКНДХКЭМХЙ neff
ПЕДХГЮИМ ЙНЯРПНЛЮ
НУНРЮ ЦНМВХИ
МЮПД НМКЮИМ
ЙПЮЯМШИ ОКНЫЮДЭ ЯНАНП
СЙБ ПЮДХНЯБЪГЭ
БМСРПЕММХИ ОЕПЕЦНПНДЙЮ
АПСЯНЙ ЮКЛЮГМШИ
ЩДЮЯ-134 ЮДЕМНЛЮ ОПЕДЯР.Ф-ГШ
ЙСПЭЕПЯЙХИ ОНВРЮ
ХГЛЕПХРЕКЭ rlc
ОНЛШРЭ ОНРНКНЙ
ЯЕПБХЯ ЮКЭТЮ КЮБЮКЭ
ЙНМБЕИЕП
protherm
ГЕПЙЮКН babyliss
asus p505
ЛЕДХЙЮЛЕМРНГМШИ ОПЕПШБЮМХЕ АЕПЕЛЕММНЯРЭ
ЯЕМЯНПМШИ ЩЙПЮМ
ЮДЕМНЛЮ ОПЕДЯРЮРЕКЭМШИ ФЕКЕГЮ
ОПНЦПЮЛЛЮ ЬХТПНБЮМХЕ
СПНЙ НУНРЮ
ОНЯРЮБЫХЙ БХМЮ
БЕМЕПНКНЦ
ТНЯТНПМШИ ЙПЮЯЙЮ
КЮД
ОПХЛЕМЕМХЕ ДНКНЛХРЮ
ОНЙПШЬЙЮ АПХДФЯРНСМ
ЩКЕЙРПНХМЯРПСЛЕМР ЛЕРЮАН
НРОСЯЙ ЙНМЕЖ
ЙБЮМРНБШИ ЛЕДХЖХМЮ
СГХ ЯДЕКЮРЭ
ТЕИПБЕПЙ БЕВЕПХМЙЮ
БХДЕНПЕЦХЯРПЮРНПШ
РНЙНБШИ ЙКЕЫ
АЮУХКЮ
КХЯРНЦХАШ
ЛЕДХЙЮЛЕРНГМНЕ АЕГНОЕПЮЖХНММНЕ ОПЕПШБЮМХЕ АЕПЕЛЕММНЯРЭ
ЯОЕЖНАСБЭ ОПНХГБНДХРЕКЭ
БПЕЛЪ БКЮДХЛХП
ЦПЮДХПМЪ БЕМРХКЪРНПМШЕ
ЙПЮЯМШИ ОКНЫЮДЭ ЦСЛ
КХЯРНЦХАШ
ОЮЯЯЮФХПЯЙХИ КХТР
ОПЕДНУПЮМХРЕКЭ ОЙМ
СОПЮБКЕМХЕ ХБЮМНБН
ЯРЕКЮФХ
ЙСУНММШИ РЕУМХЙ
ТКЮЦЬРНЙ АЮМЕПМНЦН ТКЮЦ
ЯЕПБЕП hp
ЩЙЦ 4С
БХМН ГЮЙЮГ
motorola v3i ЙСОХРЭ
АХКЕР ЖДЙФ
ОЕПЕДБХФМНИ ЯБЮПНВМШИ ЮЦПЕЦЮР
УНКНДХКЭМШИ ЖЕМРПЮКЭ
ЛХЦПЕМЭ
БХРПХМЮ ЛНПНФЕМШИ
ПСЙЮБХЖЮ
ЙПЕЮРХМ
ЯМЕЦНУНД АСПЮМ
БЮРРЛЕРП
ОПНЛШЬКЕМШИ ЮКЭОХМХГЛ
peg perego venezia
АЮЯЕИМШ intex
ЛСЯРЮМЦ КЮГЕП
КЮПЯЕМ ЖЕМРП
kiev apartaments rent
ЙСОХРЭ МНФНБЙЮ
ЯЕМЯНПМШИ ЩЙПЮМ СЯРПНИЯРБН
КХБМЕЯАНПМШЕ ПЕЬЕРЙЮ
ЙСПЭЕПЯЙХИ ОНВРЮ
АПСЯНЙ ЮКЛЮГМШИ
КЕМХМЦПЮДЯЙХИ БНЙГЮК АХКЕР
ЛШРЭЕ ОНРНКНЙ
ЯБЕРНДХНДМШИ ЩЙПЮМ
ЖБЕР ЦЮПЛНМХЪ
ЮБРНЛЮРХВЕЯЙХИ ПЕГЙЮ
ЛЮВРЮ ТКЮЦЬРНЙ
РСАЮ ЛЮЬХМЮ
БПЕЛЪ ЙНЯРПНЛЮ
ЯНГДЮМХЕ ЮМХЛЮЖХНММШИ ЙКХО
ОПНТЕЯЯХНМЮКЭМШИ ОЯХУНКНЦ
metrobond
ЛЮЯКН ТНПЛЮ
ЬРЮМЦЮ МЮЯНЯМШИ
ЮМРХЦНКНКЕДМШЕ ПЕЮЦЕМР
ЯЙПХОР ПЮЯЯШКЙЮ НАЗБКЕМХИ
ОПНЦПЮЛЛЮ ЬХТПНБЮМХЕ
ХГЛЕПХРЕКЭ rlc
ЩРХЙЕРХПНБЫХЙ
МЮПД online
ПНЛ ДНЯРЮБЙЮ
ГЮЙЮГЮРЭ ТКЮЦ
ОПНЦПЮЛЛЮ ЬХТПНБЮМХЕ ДЮММШИ
ЦЕНЛЮЬ-ЖЕМРП
ЬЮЛОЮМЯЙХИ ГЮЙЮГ
ЯНГДЮМХЕ КНЦН
ЙСККЕП 478
БНЯЯРЮМНБКЕМХЕ ТЮИК
ДХУПНХВМНЕ ГЕПЙЮКН
ФХКЮ ЙНЯРПНЛЮ
БПЕЛЪ ЮПУЮМЦЕКЭЯЙ
ДНКНЛХР
НУНРЮ
РЕЯРННЙПСЦКХРЕКЭ КЕМРНВМШИ
ЯРЕКЮФ
ЯЗЕЛМШИ ГСАМНИ ОПНРЕГ
i`m o.k./ЦЕПНХ ЦПНА
ЙБЮМРНБШИ ЛЕДХЖХМЮ