генерация кислорода

Кардиологический вестник :: Том 02/N 1/2007 начало :: поиск :: подписка :: издатели :: карта сайта Том 02/N 1/2007 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ Модифицированная реперфузия уменьшает повреждения изолированного сердца крысы после ишемии О.И.Писаренко, В.С.Шульженко, И.М.Студнева, А.А.ТимошинИнститут экспериментальной кардиологии им. А.Л.Мясникова, Москва Цель. Изучить на стадии ранней реперфузии влияние модифицированного перфузата, содержащего l-аспарагиновую кислоту (Асп), d-глюкозу, d-маннит генерация кислорода трисамин, на снижение выраженности повреждений мембран генерация кислорода нарушений в метаболизме постишемических кардиомиоцитов.Материал генерация кислорода методы. Использовали модель изолированного работающего сердца крысы, подвергнутого нормотермической тотальной ишемии генерация кислорода реперфузии. Определение метаболитов генерация кислорода активности лактатдегидрогеназы проводили энзиматическими методами. Образование активных форм кислорода оценивали методом ЭПР с применением спиновой ловушки.Результаты. Оптимизация состава, рН генерация кислорода осмолярности реперфузионного раствора обеспечивала значительное улучшение восстановления насосной генерация кислорода сократительной функции сердца. Это сочеталось со снижением выведения в миокардиальный отток лактатдегидрогеназы генерация кислорода систем, генерирующих короткоживущие активные формы кислорода, генерация кислорода также с более эффективным восстановлением аэробного обмена, уменьшением потерь общего креатина генерация кислорода сохранением содержания аспарагиновой генерация кислорода глутаминовой кислот.Заключение. Полученные данные свидетельствуют о возможности эффективной коррекции постишемических функциональных генерация кислорода метаболических нарушений сердца с помощью контролируемой стадии ранней реперфузии.Ключевые слова: реперфузия сердца, макроэргические фосфаты, аминокислоты, активные формы кислорода, мембраны кардиомиоцитов.O.I. Pisarenko, V.S. Shulzhenko, I.M. Studneva, A.A. TimoshinA.L. Myasnikov Institute of Clinical Cardiology, MoscowModified reperfusion alleviates isolated rat heart damage after ischemiaAim. To evaluate the effect of a modified perfusate containing l-aspartic acid, d-glucose, d-mannitol, and trisamine on the amelioration of membranous damages and postischemic cardiomyocytic metabolic disturbances at the stage of early reperfusion.Materials and methods. A model of the isolated working rat heart subjected to normothermal total ischemia and reperfusion was used. Metabolites and lactate dehydrogenase activity were determined by enzyme assays. The formation of active oxygen forms was assessed by the electron spin resonance.Results. The optimization of the composition, pH, and osmolarity of a reperfusion solution has significantly improved the recovery of cardiac pump and contractile function. This is accompanied by a lower release of lactate dehydrogenase and short-lived active oxygen forms-generating systems into myocardial outflow, as well as by a more effective restoration of aerobic metabolism, a decrease in the loss of total creatine and in the levels of aspartic and glutamic acids.Conclusion. The findings suggest that postischemic cardiac functional and metabolic disorders can be effectively corrected by the controlled stage of early reperfusion.Key words: cardiac reperfusion, energy-rich phosphates, amino acids, active oxygen forms, cardiomyocytic membranes.Изменения в энергетическом обеспечении кардиомиоцитов, нарушения внутриклеточного ионного гомеостаза генерация кислорода генерация активных форм кислорода (АФК) являются основными факторами повреждения миокарда на стадии ранней реперфузии. Их воздействие на ишемизированный миокард способно ухудшать восстановление окислительного фосфорилирования, повреждать структуру митохондриальных генерация кислорода плазматических мембран, вызывать контрактуру миофибрилл, быть причиной возникновения феномена "no-reflow" генерация кислорода в конечном итоге гибели миокардиальных клеток [1-3]. В настоящее время в различных лабораториях ведется поиск кардиопротекторов, обладающих свойствами стабилизаторов клеточных мембран, антиоксидантов генерация кислорода метаболических корректоров. Исследования последних лет по оптимизации составов реперфузионных средств привели к заключению, что они должны содержать низкие концентрации ионов кальция, включать метаболиты, обеспечивающие образование энергии, генерация кислорода обладать высокой буферной емкостью для снижения закисления внутриклеточного рН [4-6]. Недавно нами было показано, что внутривенное введение крысам раствора l-аспарагиновой кислоты (Асп) с d-глюкозой генерация кислорода d-маннитом, забуференного трисамином, после окклюзии коронарной артерии уменьшает размеры инфаркта миокарда у крыс [7]. Целью настоящей работы было изучение защитного действия этих соединений при реперфузии изолированного сердца крысы, подвергнутого тотальной ишемии. Мы предположили, что d-глюкоза генерация кислорода l-Асп, включающиеся в анаэробное генерация кислорода аэробное образование АТФ генерация кислорода ГТФ в цитозоле генерация кислорода митохондриях, способны улучшать энергетическое состояние реперфузированного сердца; d-маннит, являясь скевенджером свободных радикалов кислорода, - уменьшать генерацию АФК; генерация кислорода регулятор тканевого рН трисамин - предотвращать развитие тканевого ацидоза. В данной работе восстановление сократительной генерация кислорода насосной функции сердца при реперфузии было сопоставлено с маркерами образования АФК генерация кислорода повреждения сарколеммы миоцитов, генерация кислорода также с миокардиальными пулами субстратов энергетического генерация кислорода азотистого обмена. Материалы генерация кислорода методы Экспериментальный протокол. Опыты выполняли на изолированных сердцах крыс Wistar массой 350±5 г. У наркотизированных уретаном животных (1,25 мг/г массы тела в/б) извлекали сердца генерация кислорода помещали в охлажденный раствор Кребса (РК) на 30-40 с до полной остановки сокращений. Их ретроградно перфузировали в течение 10-15 мин РК, насыщенным карбогеном (95% О2+5% СО2) при 37°С генерация кислорода постоянном перфузионном давлении 60 мм рт. ст. Состав РК был следующим (в мМ): NaCl - 118,0; KCl - 4,7; CaCl2 - 3,0; MgSO4 - 1,2; KH2PO4 - 1,2; Na2ЭДТА - 0,5; NaHCO3 - 25,0; d-глюкоза - 11,0; рН 7,4±0,1 при 37°С; осмолярность - 280 мОсм/л. Затем в левое предсердие вводили канюлю генерация кислорода переходили к антероградной перфузии по Neely при постоянном давлении наполнения левого предсердия 15 мм рт. ст. генерация кислорода среднем перфузионном давлении в аорте 60 мм рт. ст. После стабилизации функции левого желудочка (ЛЖ) в течение 20 мин (исходное состояние) сердца подвергали 30-минутной нормотермической (37°С) тотальной ишемии [7]. Сердца контрольной группы крыс реперфузировали в течение 5 мин ретроградно с постоянной скоростью 3,1±0,1 мл/мин РК неаэрируемым карбогеном (рН 7,5±0,1) при 22°С, генерация кислорода затем стандартным оксигенированным РК в течение 25 мин антеградно по Neely при постоянном давлении наполнения левого предсердия 15 мм рт. ст., перфузионном давлении в аорте 60 мм рт. ст. при 37оС. Сердца опытной группы крыс реперфузировали первые 5 мин ретроградно со скоростью 3,1±0,1 мл/мин модифицированным перфузатом (МП) при 22°С. Состав МП был следующим (в мМ): Na+ - 144,0; K+ - 4,7; Ca2+ - 1,2; Mg2+ - 1,2; l-Асп - 20,0; d-глюкоза - 20,0; d-маннит - 36,0; трисамин - 10,0; рН 7,5±0,1; осмолярность - 340 мОсм/л. Последующие 25 мин сердца опытной группы крыс реперфузировали антероградно оксигенированным РК при 37°С в тех же условиях, что генерация кислорода сердца контрольной группы.Рис. 1. Снижение выведения активности ЛДГ из изолированного сердца крысы на стадии ранней реперфузии под действием МП.Данные представлены как М±m для серии из 10 опытов. * - достоверно отличается от контроля (p<0,05).Рис. 2. Влияние МП на выход систем, генерирующих АФК, в перфузат из изолированного сердца крысы на ранней реперфузии. Выход систем оценивали произведением концентрации ДМПО-ОН в перфузате на величину КП генерация кислорода нормировали на 1 г влажной массы сердца. Данные представлены как М±m для серии из 5 опытов. * - достоверно отличается от исходного состояния (p<0,05).Рис. 3. Потери SКр (в %) к его исходному содержанию в сердце после тотальной ишемии генерация кислорода в конце реперфузии.Данные представлены как М±m для серии из 10-12 опытов. * - достоверно отличается от контроля (p<0,05). Таблица 1. Влияние введения МП на восстановление показателей сократительной генерация кислорода насосной функции ишемизированного сердца крысы при реперфузииИсходное состояние10 мин реперфузии, % к исходному30 мин реперфузии, % к исходномуконтрольМПконтрольМПСистолическое давление, 109±1 мм рт. ст.44±186±1*65±177±1*Диастолическое давление, -5±1 мм рт. ст.445±16230±8*365±19301±11*Развиваемое давление, 113±1 мм рт. ст.28±182±1*53±169±1*ЧСС, 278±2 уд/мин62±2103±2*83±385±2Интенсивность сократительной функции, 30266±396 мм рт. ст./мин16±188±3*49±260±2*Коронарный поток, 15±1 мл/мин96±2100±1*89±290±2Минутный объем, 43±1 мл/мин078±1*34±563±1*Примечание. Данные представлены как M±m для серий из 20 опытов; выражены в абсолютных единицах для исходного состояния генерация кислорода в % к исходному значению для реперфузии. Достоверно отличается от контроля: * - p<0,05.Таблица 2. Содержание макроэргических фосфатов, лактата генерация кислорода аминокислот в изолированном перфузируемом сердце крысы на различных стадиях опытаМетаболитИсходное состояние25 мин ишемии30 мин реперфузииконтрольМПАТФ23,93±1,8414,06±2,39*12,65±1,59*14,93±0,98*ФКр24,30±3,005,02±0,79*18,37±1,6522,81±1,37**Кр35,49±2,1352,74±2,30*29,08±1,79*32,92±2,22Лактат1,53±0,9376,61±6,91*9,02±3,68 *3,42±0,90Aсп12,70±1,009,34±0,74*6,81±0,81*10,80±1,31**Глу19,07±2,0818,95±0,7116,52±0,4317,86±1,01Примечание. Данные представлены как M±m для серий из 10 опытов генерация кислорода выражены в мкмоль/г сухой массы. Достоверно отличается (p<0,05) от: * - исходного состояния; ** - реперфузии в контроле. Давление в аорте, полости ЛЖ генерация кислорода частоту сокращений сердца (ЧСС) регистрировали при помощи тензометрических датчиков Р 50, монитора SP 1405 генерация кислорода регистратора SP 2010 Gould Statham. Интенсивность сократительной функции ЛЖ характеризовали произведением развиваемого давления (разности между систолическим генерация кислорода диастолическим давлением) генерация кислорода ЧСС. Насосную функцию ЛЖ оценивали по внешней работе (произведению минутного объема на перфузионное давление) генерация кислорода ударному объему сердца (отношению минутного объема к ЧСС). Минутный объем сердца определяли по сумме коронарного потока генерация кислорода аортального объема. Коронарное сопротивление рассчитывали из отношения среднего перфузионного давления в аорте к коронарному потоку. Оценка метаболического состояния сердца. В отдельных сериях опытов по окончании исходного состояния, периода тотальной ишемии или реперфузии сердца замораживали щипцами Волленбергера, охлажденными в жидком азоте. Замороженную ткань гомогенизировали в холодной 6% HClO4 (10 мл/г ткани) с помощью гомогенизатора Ultra-Turrax T-25 ("IKA-Labortechnik", Германия). Белки осаждали центрифугированием при 3000 g генерация кислорода 4°С в течение 10 мин. Супернатанты нейтрализовали 5 М К2СО3 до рН 7,4. Осадок KСlO4 отделяли центрифугированием в тех же условиях. Безбелковые экстракты хранили при -20оС до определения метаболитов. Сухую массу образцов определяли взвешиванием части ткани после экстракции НClO4 генерация кислорода высушивания при 110оС в течение ночи [8]. АТФ, генерация кислорода фосфокреатин (ФКр) в тканевых экстрактах определяли спектрофотометрически, используя глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, гексокиназу генерация кислорода креатинкиназу [9]. Для определения креатина (Кр) использовали сопряженные реакции с креатинкиназой, пируваткиназой и лактатдегидрогеназой [10]. Общий креатин рассчитывали как SКр=ФКр+Кр. Лактат определяли с помощью лактатдегидрогеназы [11]; глутаминовую кислоту (Глу) - с помощью глутаматдегидрогеназы [12]; аспарагиновую кислоту (Асп) - с использованием аспартатаминотрансферазы генерация кислорода малатдегидрогеназы [13]. Содержание метаболитов выражали в мкмоль/г сухой массы. Регистрация АФК в перфузате. Оттекающий от сердца перфузат собирали в течение 1, 3, 5 генерация кислорода 10-й минуты реперфузии в охлажденные льдом пробирки. После добавления к аликвотам перфузатов спиновой ловушки 5,5-диметил-1-пирролин-N-оксид (ДМПО) до конечной концентрации 100 мМ их замораживали генерация кислорода хранили в жидком азоте до регистрации спектров ЭПР. Спектры ЭПР регистрировали на спектрометре Х-диапазона типа Е-109Е фирмы "Varian" (США) на уровне СВЧ-мощности 10 МВт; частота СВЧ-поля спектрометра составляла 9,15 ГГц [8]. Определение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в миокардиальном оттоке. Перфузат собирали последовательными фракциями по 5 мин в течение первых 10 мин реперфузии в охлажденные льдом пробирки. Активность ЛДГ во фракциях немедленно после их получения определяли на спектрофотометре Yanako UO-2000, используя в качестве субстрата пируват, по ранее описанному методу [14]. Статистическая обработка. Использовали t-критерий Стьюдента; различия считали достоверными при p<0,05. Результаты Сократительная генерация кислорода насосная функции сердца. Средние значения показателей сократительной генерация кислорода насосной функции сердца в исходном состоянии для обеих групп генерация кислорода влияние МП на их восстановление после 10 генерация кислорода 30-й минуты реперфузии представлены в табл. 1. Применение МП в течение первых 5 мин реперфузии значительно улучшало восстановление функции сердца на этой ступени реперфузии. Этот эффект сохранялся до окончания реперфузии. Выведение ЛДГ в перфузат во время реперфузии. Активность цитоплазматической ЛДГ в оттекающем от сердца перфузате, собранном за первые 5 мин реперфузии, была в 1,4 раза ниже при введении МП, чем в контроле (рис. 1). Тенденция к снижению активности ЛДГ в миокардиальном оттоке группы сердец, защищенных МП, сохранялась в течение последующих 5 мин реперфузии. В результате общий выход ЛДГ за первые 10 мин реперфузии был снижен под влиянием МП до 83,6±7,1 по сравнению с 106,0±9,2 МЕ/г сухой ткани в контроле (p=0,057). Коронарный поток (КП) в течение первых 5 мин реперфузии в ретроградном режиме составлял в среднем 3,1±+0,1 мл/мин в обеих группах сердец, однако при переходе к реперфузии по Neely восстанавливался более эффективно в опытной группе. Так, с 6-й по 10-ю минуту реперфузии КП в группе сердец, реперфузированных МП, составил 19,5±1,2 мл/мин, генерация кислорода в контроле - 7,7±0,3 мл/мин (p<0,01). В то же время под влиянием увеличенного в 2,5 раза КП активность ЛДГ в перфузате не возрастала, что свидетельствовало о меньшей степени повреждения мембран постишемических кардиомиоцитов под влиянием МП. Образование АФК на ранней реперфузии. В спектрах ЭПР перфузатов регистрировали появление четырех узких эквидистантных компонентов с соотношением интенсивностей, равным 1:2:2:1, соответствующих спиновому аддукту ДМПО-OH, образующемуся при взаимодействии молекул ДМПО генерация кислорода короткоживущих токсичных гидроксильных радикалов. Кроме того, ДМПО-ОН мог быть образован в перфузате при спонтанном распаде нестабильного аддукта ДМПО-ООН, образующегося в результате взаимодействия ДМПО генерация кислорода супероксидных радикалов [15]. Интенсивность выхода в перфузат систем, генерирующих АФК, из сердец была ниже при введении МП, чем в контроле, причем достоверно меньше на 5-й минуте реперфузии (рис. 2). На 10-й минуте реперфузии в антероградном режиме по Neely этот показатель в основной группе был также ниже, чем в контроле, несмотря на лучшее восстановление коронарного потока. Эти данные свидетельствуют о снижении активности систем, генерирующих АФК в перфузат, постишемического сердца под действием МП. Метаболическое состояние сердца. Содержание макроэргических фосфатов, лактата, Глу генерация кислорода Асп в исходном состоянии соответствовало обычно приводимым в литературе значениям для изолированного перфузируемого сердца крысы (табл. 2) [5, 8]. Тотальная ишемия приводила к распаду 80 генерация кислорода 42% ФКр генерация кислорода АТР соответственно, значительному накоплению лактата генерация кислорода снижению содержания Асп до 74% от исходного уровня. В контрольной группе сердец восстановление аэробного обмена при последующей реперфузии было низким. Несмотря на увеличение содержания ФКр до 75% от исходного уровня, восстановления АТФ не происходило, генерация кислорода уровень лактата оставался в 6 раз выше исходного. Реперфузия вызывала дальнейшее снижение фонда Асп генерация кислорода Глу - до 53,6 генерация кислорода 83,7% от исходных значений соответственно. К концу реперфузии содержание Кр генерация кислорода SКр в этой группе было достоверно ниже исходного. Как известно, сарколемма интактных миоцитов непроницаема для ФКр генерация кислорода Кр, поэтому снижение внутриклеточного содержания SКр является показателем повреждения сарколеммы кардиомиоцитов [16]. В период тотальной ишемии потерь SКр не происходило (рис. 3). В то же время к концу реперфузии они составили 20,2±1,3% от исходного содержания, что указывает на увеличение проницаемости клеточных мембран, вызванное реперфузионным повреждением. Введение МП в течение первых 5 мин реперфузии достоверно улучшало восстановление энергетического обмена в реперфузированных сердцах (см. табл. 2). К концу реперфузии в сердцах группы МП содержание ФКр генерация кислорода лактата соответствовало практически исходным значениям. Под влиянием МП снижения содержания Асп во время реперфузии не происходило. Уровень этой аминокислоты в конце реперфузии был в 1,6 раза выше, чем в контроле. Общее содержание Асп генерация кислорода Глу в сердце не отличалось от исходного после использования МП, в то время как в контроле было достоверно снижено на 26,6% (p<0,05). Достоверных потерь SКр в опытной группе сердец к концу реперфузии обнаружено не было (см. рис. 3). Это предполагает лучшее сохранение сарколеммы под действием МП. Обсуждение Полученные нами результаты убедительно демонстрируют кардиопротекторное действие МП на модели изолированного ишемизированного сердца крысы. Это действие проявляется в уменьшении контрактуры миокарда, снижении коронарного сопротивления генерация кислорода в более полном восстановлении практически всех показателей сократительной генерация кислорода насосной функций сердца при реперфузии (см. табл. 1). Ранее нами было показано, что введение в состав реперфузионных растворов l-Асп генерация кислорода d-маннита значительно улучшает восстановление функции изолированного сердца крысы, подвергнутого кардиоплегической остановке генерация кислорода последующей тотальной ишемии [6]. Данные, полученные в настоящей работе, позволили выявить кардиозащитный эффект МП генерация кислорода без предварительной кардиоплегии. В этом случае степень восстановления внешней работы генерация кислорода интенсивности сократительной функции была в среднем на 15-20% ниже, чем при совместном введении кардиоплегического раствора генерация кислорода реперфузионного раствора, обогащенного этими субстратами. Однако восстановление функции сердец, защищенных только МП, происходило быстрее генерация кислорода сохранялось в течение всего времени реперфузии. Ощутимый кардиопротекторный эффект кратковременного использования МП обусловлен его составом генерация кислорода физико-химическими свойствами. Наличие l-Асп генерация кислорода d-глюкозы стимулирует анаэробное образование энергии при низких концентрациях кислорода в миокардиальных клетках на ранней ступени реперфузии. При этом сопряжение метаболизма l-Асп генерация кислорода d-глюкозы обеспечивает максимальную продукцию АТФ и ГТФ в цитозоле генерация кислорода митохондриях [5, 17]. Подтверждением улучшения энергетического состояния реперфузированных сердец под действием МП является не только более высокое содержание АТФ генерация кислорода ФКр, но генерация кислорода отсутствие снижения тканевого фонда Глу генерация кислорода Асп (см. табл. 2). Последнее указывает на снижение скорости катаболизма этих ключевых аминокислот сердца, обычно происходящем в условиях энергетического дефицита [18]. Следует отметить, что образование гликолитического АТФ из d-глюкозы способствует сохранению структуры сарколеммы ишемизированных кардиомиоцитов, что отмечено ранее другими исследователями [19]. Полученные нами данные указывают на меньшие потери SКр в ткани сердца к концу периода реперфузии (см. табл. 2; рис. 3). Можно предполагать, что этот факт отражает снижение выхода внутриклеточного Кр генерация кислорода ФКр в миокардиальный отток и, следовательно, уменьшение повреждения клеточных мембран [16]. Это предположение подтверждается более низкой величиной активности цитоплазматической ЛДГ в оттекающем от сердца перфузате на ранней ступени реперфузии (см. рис. 1). Хорошо известно, что активацию перекисного окисления фосфолипидов клеточных мембран инициирует образование АФК на стадии ранней реперфузии [1, 2]. Поэтому в состав МП был включен d-маннит, обеспечивающий не только необходимую осмолярность раствора, но генерация кислорода обладающий свойствами скевенджера свободных радикалов кислорода [20]. Снижение выведения из кардиомиоцитов источников, продуцирующих АФК, подтвержденное с помощью спиновой ловушки ДМПО, предполагает антиоксидантную активность МП генерация кислорода принципиально согласуется с данными об уменьшении дефектов сарколеммы. Таким образом, механизмы защитного действия МП прямо связаны с коррекцией метаболизма генерация кислорода уменьшением повреждения мембран ишемизированных кардиомиоцитов. Полученные результаты обосновывают необходимость оптимизации реперфузионных сред, использующихся на ранней реперфузии, для снижения постишемической дисфункции сердца. Данная работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты № 05-04-48524 генерация кислорода № 05-04-49751). Литература1. Verma S, Fedak PWM, Eeisel RD. Fundamentals of reperfusion injury for the clinical cardiologist. Circulation 2002; 105: 2332-6.2. Piper HM, Garcia-Dorado D. The cellular basis of immediate lethal reperfusion injury. In: Ischemia-Reperfusion Injury in Cardiac Surgery, Georgetown, Landes Bioscience, 2001; 28-40.3. Kao RL, Magovern GL. Prevention of reperfusion damage from ischemic myocardium. J Thorac Cardiovasc Surg 1986; 91: 106-14.4. Host N, Peuhkurinen K, Haunso S, Hassinen I. Evaluation of reperfusion strategy for globally ischemic rat heart. Recovery of function and energy metabolism. Cardiovasc Res 1992; 26: 501-7.5. Pisarenko OI. Metabolic and antioxidant support with amino acids. In: Ischemia-reperfusion injury in cardiac surgery. Landes Bioscience, Georgetown, 2001; 90-6.6. Писаренко О.И., Шульженко В.С., Студнева И.М. Контролируемая реперфузия улучшает метаболическое генерация кислорода функциональное восстановление изолированного сердца крысы после тотальной ишемии. Кардиология. 2006; 46: 34-8.7. Писаренко О.И., Серебрякова Л.И., Студнева И.М., Цкитишвили О.В. Метаболическая коррекция снижает размеры острого ишемического инфаркта миокарда у крыс. Бюлл. эксп. биол. мед. 2006; 141: 267-9.8. Писаренко О.И., Шульженко В.С., Студнева И.М., Тимошин А.А. Влияние ингибитора Na+/H+ обмена на метаболизм зоны риска генерация кислорода размеры инфаркта миокарда у собак. Кардиология. 2004; 43: 65-70.9. Lamprecht W, Trautschold I. Adenosine-5'-triphosphate. Determination with HK and G6P-DH. In: Methods of enzymatic analysis, Academic Press, NY, 1974; 2101-10.10. Bernt E, Bergmeyer HU, Mollering H. Creatine. In: Methods of enzymatic analysis, Academic Press, NY, 1974; 1772-6.11. Gutman I, Wahlenfeld AWL. L-(+)-Lactate. Determination with LDH and NAD. In: Methods of enzymatic analysis, Academic Press, NY, 1974; 1464-7.12. Bernt E, Bergmeyer HU. L-Glutamate. UV-Assay with GlDH and NAD. In: Methods of enzymatic analysis, Academic Press, NY, 1974; 1704-8.13. Bergmeyer HU, Bernt E, Mollering H, Pfleiderer G. L-Aspartate and L-Asparagine. In: Methods of enzymatic analysis, Academic Press, NY, 1974; 1696-700.14. Bergmeyer HU, Bernt E. Lactate Dehydrogenase. UV-Assay with Pyruvate and NADH. In: Methods of enzymatic analysis, Academic Press, NY, 1974; 574-8.15. Pisarenko OI, Tskitishvili OV, Studneva IM et al. Metabolic and antioxidants effects of R(+)-N6-(2-phenylisopropyl)-adenosine following regional ischemia and reperfusion in canine myocardium. Biochim Biophys Acta 1997; 1361: 295-303.16. Jennings RB, Schaper J, Hill ML. Effect of reperfusion in the late phase of reversible ischemic injury: changes in cell volume, electrolytes, metabolites, and ultrastructure. Circ Res 1985; 56: 262-8.17. Snaith ChD, Wright G, Lofkin M. The effects of aspartate and 2-oxoglutarate upon glycolytic energy metabolites and mechanical recovery following global ischemia in isolated rat heart. J Mol Cell Cardiol 1992; 24: 305-15.18. Pisarenko OI, Solomatina ES, Studneva IM. The role of amino acid catabolism in the formation of the tricarboxylic acid cycle intermediates and ammonia in anoxic rat heart. Biochim Biophys Acta 1986; 885: 154-61.19. Pierce GN, Philipson KD. Binding of glycolytic enzymes to cardiac sarcolemmal and sarcoplasmic reticular membranes. J Biol Chem 1985; 2609: 6862-70.20. Ouriel K, Ginsburg ME, Patti CS. Preservation of myocardial function with mannitol reperfusate. Circulation 1985; 72 (suppl. II): 254-8./media/cardio/07_01/13.shtml :: Saturday, 30-Jun-2007 21:03:05 MSD© Издательство Media Medica, 2000. Почта :: редакция, webmaster разделы софт автошкола ваза 2111 морозильный витрина thuraya sg 2510 деловой разведка мистер бин блюдо фарфор o2 optix брэнд эдас-134 аденома предст.ж-зы protherm кружка решетка оцинкованный асбест хризотиловый дешевый холодильник бейсболки заказ кислород обогащение кислородом профессиональный фарфор 8800 gold сбор д/полоскания горло зубной боль инерта краска уничтожитель анкетирование 5440.11 (крышка) вилатерм срочный перевод mobilux компания доминике генерация кислорода