креатин

РОЛЬ ИОНОТРАНСПОРТНЫХ СИСТЕМ САРКОЛЕММЫ В ПОТЕРЕ АМИНОКИСЛОТ ПРИ ПЕРФУЗИИСЕРДЦА БЕСКАЛЬЦИЕВОЙ СРЕДОЙ И ПОВРЕЖДЕНИИ МИОКАРДА ПРИ КАЛЬЦИЕВОМ ПАРАДОКСЕ ~ Вопросы медицинской химииmedi.ru»» Периодика»» Вопросы медицинской химии»» № 3 '99УДК 616.12©Коллектив авторовРОЛЬ ИОНОТРАНСПОРТНЫХ СИСТЕМ САРКОЛЕММЫ В ПОТЕРЕ АМИНОКИСЛОТ ПРИ ПЕРФУЗИИСЕРДЦА БЕСКАЛЬЦИЕВОЙ СРЕДОЙ И ПОВРЕЖДЕНИИ МИОКАРДА ПРИ "КАЛЬЦИЕВОМ ПАРАДОКСЕ"В.В. АЛАБОВСКИЙ, Э.ДЖ. КРЭГОУ (мл*), А.А. ВИНОКУРОВВоронежская Государственная Медицинская академия имени Н.Н.Бурденко,г. Воронеж. тел.: (0732) 560338*Накогдочес ТХ 75963- 1548, П/я 631548, Техас, СШАCнижение концентрации Na+ до 30 мМ в бескальциевой среде приводит кусилению потери аминокислот миокардом. Увеличение содержания Na+ в растворедо 200 мМ препятствовало выходу аминокислот из сердца, перфузируемого бескальциевойсредой. Обнаружена обратная корреляция между выходом аминокислот из сердцапри перфузии бескальциевой средой (Глу, Глн, Асп, Асн, Ала, Гли), с однойстороны, креатин восстановлением параметров дыхания митохондрий (величины дыхательногоконтроля по Чансу креатин скорости фосфорилирования), содержанием АТФ креатин фосфокреатинапри восстановлении прежней концентрации Са2+, с другой стороны.Ингибирование К+-Сl-котранспорта препаратом DIOA (10 мкМ) или Сl -каналовIАА-94 (1,5 мкМ) усиливало высвобождение в раствор аминокислот (Глу, Глн,Асп, Асн, Ала, Гли, Тау). Следовательно, транспорт аминокислот в кардиомиоцитахзависит не только от величины трансмембранного градиента Na+, но креатин от активностидругих систем транспорта ионов. Сохранение внутриклеточного пула аминокислотпри перфузии сердца бескальциевой средой способствует сохранению на высокомуровне параметров дыхания митохондрий креатин внутриклеточных макроэргическихсоединений при восстановлении прежней концентрации Са2+ ("кальциевом парадоксе").Ключевые слова: сердце, "кальциевый парадокс", Na+, повреждение,креатин, аминокислоты.ВВЕДЕНИЕ. Реперфузия сердца Са-содержащим раствором после непродолжительнойперфузии бескальциевой средой сопровождается повреждением кардиомиоцитов,развитием контрактуры миофибрилл,нарушением энергетического состояния миокарда[1, 2]. Данное явление, обнаруженное в 1966 году, было названо "кальциевымпарадоксом". Несмотря на интенсивные исследования, механизм развития "кальциевогопарадокса" все еще остается неясным. Установлено, что при перфузии сердцабескальциевой средой происходит накопление в кардиомиоцитах Na+ креатин их набухание[3]. Подобно другим клеткам, кардиомиоциты имеют систему регуляции своегообъема. Набухание кардиомиоцитов сопровождается активированием механизмоввосстановления их прежнего размера (так называемое регуляторное уменьшениеобъема) за счет выхода из клеток осмотически активных веществ, в том числеаминокислот креатин других анионов, в частности Сl- [3-7]. В настоящее времяостается неизвестным, существует ли взаимосвязь между анион-транспортнымисистемами сарколеммы креатин потерей аминокислот при перфузии сердца бескальциевойсредой. Известно, что для некоторых аминокислот в сарколемме кардиомиоцитовимеются транспортные системы, активируемые Na+ (Na+/аминокислотный котранспорт).Однако, значение внеклеточной концентрации Na+ в регуляторной потере аминокислотпри "кальциевом парадоксе'' остается неясным.Учитывая это, целью настоящего исследования явилось изучение взаимосвязимежду глубиной повреждения кардиомиоцитов креатин потерей сердцем аминокислотв зависимости от величины градиента Na+, активности К+-Сl- -котранспортаи Cl- -каналов при "кальциевом парадоксе".МЕТОДИКА. Эксперименты проводились на изолированных сердцах белыхбеспородных крыс, перфузированных по методу Лангендорфа раствором Рингера-Локка(в мМ): NaCl - 140; NaH2P04 - 0,5; KCl - 5,0; трис-ОН - 5 (pH=7,4); CaCl2- 2; глюкозы - 11. Все растворы подогревали до 37оС креатин насыщаликислородом. Крыс декапитировали, вскрывали грудную клетку креатин сердце помещалив охлажденный раствор Рингера -Локка. В аорту вводили канюлю креатин со скоростью10 мл/мин на 1 г влажной массы подавали исходный раствор в течение 15 минутдля стабилизации сократительной функции креатин показателей энергетического состояния.После периода стабилизации сократительной функции сердце перфузировалибескальциевой средой, содержащей 0,5 мМ ЭДГА в течение 10 минут. По окончанииперфузии бескальциевой средой через сердце пропускали исходный раствор,содержащий 2,0 мМ СаСl2.Изменение концентрации Na+ производили только во время перфузии сердцабескальциевой средой. При уменьшении содержания в растворе хлорида натрияосмотичность сохраняли добавлением соответствующего количества сахарозы.Реперфузию во всех сериях экспериментов осуществляли исходным раствором.Через 5 минут реперфузии сердца исходным раствором сердца замораживалипри температуре жидкого азота щипцами Волленбергера креатин готовили тканевыеэкстракты с помощью 6 % трихлоруксусной кислоты. После центрифугированияпри 3000 g супернатант нейтрализовали 2 N КОН при 0-4оС креатин определялисодержание адениннуклеотидов стандартными ферментативными методами [8].Содержание креатина оценивали спектрофотометрически с помощью альфа-нафтола.Концентрацию фосфокреатина вычисляли по разности содержания в ткани креатинаи суммарного креатина (креатин + фосфокреатин) [9]. Выделение митохондрийи изучение параметров их дыхания производили по методикам, описанным ранее[1]. Белок определяли биуретовым методом. Концентрацию ионов кальция врастворах контролировали с помощью ионоселективного электрода ЭИ-Са-01и электронного потенциометра ВЛ-750.Концентрацию аминокислот в бескальциевом растворе, оттекающем от сердцаисследовали с помощью аминокислотного анализатора Т339 (Чехия).Величину набухания кардиомиоцитов оценивали по накоплению воды в тканисердца, определяя содержание воды в миокарде, соотнесенное на 1 грамм сухоймассы. Для этого образцы сердечной мышцы высушивали при 1000 в течение24 часов.Для оценки глубины повреждения кардиомиоцитов при "кальциевом парадоксе"использовали следующие показатели: содержание в ткани сердца адениннуклеотидов,фосфокреатина креатин креатина, сопряжение процессов окисления креатин фосфорилированияв митохондриях [1].В исследовании использованы препараты DIOA в концентрации 5 мкМ, блокирующейболее чем на 90% К-Сl-котранспорт креатин IАА94, ингибирующий на 50% Сl-каналы.В работе были использованы миоглобин лошади креатин трисамин ("Sigma"), ферментыи коферменты "Boehnringer Mannheim GmbH" (Германия). Остальные реактивы- отечественного производства квалификации "х.ч.".Полученные данные обработаны методом вариационной статистики с использованиемкритерия t Стьюдента, анализа вариации ANOVA.РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Проведенные эксперименты показали, чтоперфузия сердца бескальциевой средой, содержащей 0,5 мМ ЭДТА в течение10 минут приводит к высвобождению из сердца аминокислот- таурина, глутамата,глутамина, аспартата, аспарагина, аланина креатин глицина (табл. 1).Таблица 1. Влияние ионного состава раствора, строфантина, IАА94 креатин DIOAна концентрацию некоторых аминокислот (мкМ), в оттекающем от сердца перфузионномрастворе. CоставТауринАспартатАспарагинГлутаматГлутаминГлицинАланин[Са2+]=2 [Na+]=140 мМ0,1+/-0,01***0***0,1+/-0,05***0,2+/-0,1***0***0***0***[Ca2+]=0 [Na+]=30 мM170,5+/-10,7***24,48+/-1,9**15,13+/-0,42*40,36+/-1,11**17,34+/-9,3218,06+/-2,1248,13+/-4,47** [Ca2+]=0 [Na+]=140 мM (контроль)44,32+/-6,509,25+/-1,1212,90+/-0,6912,80+/-1,2421,20+/-1,5016,80+/-1,9712,82+/-0,92 [Ca2+]=0 [Na+]=140 мM сахароза - 120 мМ41,00+/-9,808,08+/-0,0511,80+/-0,2612,62+/-2,2024,32+/-0,6716,12+/-3,7313,1+/-1,44 [Ca2+]=0 [Na+]=200 мM31,8+/-1,8*4,3+/-1,03***9,21+/-2,24,48+/-0,412,60+/-1,30**7,20+/-1,80*8,74+/-0,23* [Ca2+]=0 [Na+]=200 мM строфантин - 50 мкМ115,3+/-12,9*26,52+/-3,6722,02+/-3,33*17,65+/-l,75*31,13+/-5,3*28,6+/-3,0*30,38+/-6,01* [Ca2+]=0 [Na+]=140 мM DIOA - 5 мкM72,94+/-2,70**14,84+/-1,01*8,57+/-1,8015,65+/-0,60*21,70+/-2,0724,46+/-2,07*18,07+/-1,5* [Ca2+]=0 [Na+]=140 мM IАА-94 - 1,5 мкM68,86+/-4,4*18,48+/-2,6**24,61+/-1,12**29,68+/-2,0532,48+/-2,74**22,04+/-0,95*9,13+/-1,1 [Ca2+]=0 [Na+]=140 мM HMA - 1 мкМ27,8+/-2,538,05+/-0,3*11,7+/-0,2211,76+/-2,814,1+/-0,577,90+/-2,9013,30+/-1,72 Примечание. Здесь креатин в последующих таблицах, достоверность различий по сравнениюс контролем: одна звездочка - р < 0,05; две - р< 0,01; три - р<0,001.Последующая реперфузия сердца исходным раствором, содержащим 2,0 мМСа2+, приводит к значительным изменениям энергетического состояния кардиомиоцитов(табл. 2). Установлено, что развитие "кальциевого парадокса" сопровождаетсяснижением концентрации адениннуклеотидов, фосфокреатина креатин креатина болеечем на 50-90% по сравнению с исходным состоянием. В митохондриях сердцаотмечается разобщение процессов окисления креатин фосфорилирования,снижение показателяАДФ/О креатин скорости фосфорилирования (табл. 3). Одновременно отмечается выходзначительного количества миоглобина в оттекающий от сердца перфузионныйраствор креатин увеличение количества воды в миокарде (табл. 4).Уменьшение концентрации хлорида натрия до 30 мМ (осмотичность поддерживалидобавлением соответствующего количества сахарозы) вызывало усиление потерисердцем таурина, глутамата, глутамина, аспартата, аспарагина, аланина иглицина по сравнению с контролем. Содержание в перфузионном растворе другихаминокислот (ралина, лейцина, изолейцина, аргинина, тирозина, триптофана,серина, фенилаланина, лизина) было незначительным креатин не зависело от ионногосостава среды перфузии (данные не представлены). Последующая реперфузияСа-содержащим раствором усиливала выход миоглобина из сердца более чемза четыре раза по сравнению с экспериментами, в которых бескальциевая средасодержала физиологическую концентрацию хлорида натрия (табл. 4). Одновременноотмечалось полное разобщение процессов окисления креатин фосфорилирования в митохондриях,уменьшение до нуля концентрации АТФ креатин фосфокреатина в мышце сердца (табл.2, 3).Таблица 2. Влияние концентрации Na+ на содержание адениннуклеотидов,фосфокреатина креатин креатина в сердце при "кальциевом парадоксе" (мкмоль/гсухой массы). [Na+] в бескальциевой средеАТФАДФАМФкреатинфосфокреатининтактное сердце23,5+/-07*8,5+/-0,3*1,1+/-0,02*51,7+/-1,7*34,3+/-470*[Nа+]=140 мМ (контроль)4,9+/-0,13,5+/-0,12,8 +/-0,1035,2+/-1,10,7+/-0,03[Na+]=30 мМ0+/-0*2,4+/-0,3*2,2+/-0,10*17,4+/-0,4*0+/-0*[Nа+] - 200 мМ, строфантин 50 мкМ0+/-0*1,8+/-1,12,3+/-1,411,4+/-0,4*0+/-0*[Na+]=200 мМ12,6+/-0,3*2,7+/-0,2*1,4+/-0,10*69,9+/-3,8*8,8+/-1,60*Таблица 3. Влияние концентрации ионов натрия во время перфузии сердца бескальциевойсредой на некоторые показатели окислительного фосфорилирования митохондрийпосле реперфузии Са-содержащим раствором "кальциевом парадоксе" Серии экспериментовСубстраты окиcленияГлутамат креатин малат (по 5 мМ)альфа-кетоглутарат (10 мМ)ДК /Чанc/АДФ/ОАДФ/Т мкмоль/с на 1 мг белкаДК /Чанc/АДФ/ОАДФ/Т мкмоль/с на 1 мг белкаисходное состояние3,97+/-0,10**3,01+/-0,10**7,08+/-0,1**3,17+/-0,2**3,02+/-0,20**5,98+/-0,30**Na+=140 мM (контроль)1,22+/-0,041,16+/-0,400,48+/-0,21,09+/-0,31,09+/-0,30,42+/-0,04Na+=30 мM1,01+/-0,10--1,05+/-0,10--Na+=200 мM3,18+/-0,10**3,29+/-0,05**3,73+/-0,14**2,15+/-0,08*2,14+/-0,10**2,87+/-0,64**Na+=200 мM строфантин 50 мкМ1,03+/-0,11--1,06+/-0,12--Na+=140 мM сахароза 1201,26+/-0,041,18+/-0,40,52+/-0,21,19+/-0,30,56+/-0,010,56+/-0,01Примечание: Представлены данные 5-14 экспериментов в серии. Значимостьразличий по сравнению с контролем (Na+=140 мМ).Таким образом, снижение концентрации Na+ в бескальциевой среде усиливаетнабухание кардиомиоцитов креатин выход из них аминокислот.Увеличение концентрации Na+ до 200 мМ, наоборот, препятствовало выходуаминокислот в оттекающий перфузионный раствор (табл. 1). Одновременно уменьшалсявыход миоглобина из сердца при реперфузии Са-содержащим раствором, сохраняласьна высоком уровне концентрация АТФ креатин фосфокреатина, сопряжение процессовокисления креатин фосфорилировния в митохондриях (табл. 1-4). Одновременно гипернатриеваясреда ослабляла накопление воды в миокарде более чем в 2 раза по сравнениюс контролем. Для уточнения механизма действия высокой концентрации Na+были проведены эксперименты, в которых осмотическое давление бескальциевойсреды было увеличено путем добавления сахарозы, но не хлорида натрия. Опытыпоказали, что такие растворы не снижают потерю миокардом аминокислот, накоплениеводы креатин глубину повреждения сердца при "кальциевом парадоксе".Как известно, высокий внеклеточный уровень натрия способен создаватьболее высокий трансмембранный градиент Na+ только в условиях сохраненияактивности Na,K-АТФазы [10]. Для уточнения данного положения нами былипроведены эксперименты, в которых изучалось влияние гипернатриевой средыв условиях, приводящих к снижению активности Nа,К-АТФазы. С этой цельюв бескальциевый раствор добавляли 50 мкМ строфантин. Реперфузию сердцаосуществляли исходным раствором, содержащим физиологический уровень Са2+и Na+. Эксперименты показали, что в присутствие блокатора Nа, К-АТФазыгипернатриевая среда теряет защитные свойства креатин усиливает как выход аминокислотиз миокарда, так креатин набухание кардимиоцитов.Таблица 4. Влияние концентрации Na+ креатин сахарозы на содержание воды вмиокарде (мл/мг сухой массы) креатин выход аминокислот из сердца (мкг/г сухоймассы) при перфузии сердца бескальциевой средой (М+/-m)Серия экспериментовСуммарное количество аминокислот(Taу, Aлa, Глу, Глн, Гли, Aсп, Aсн) Количество воды[Са2+]=0[Na+]=140 мM контроль 185,77+/-12,211,54+/-0,20[Ca2+]=0[Na+]=30 мM334,0+/-12,433,95+/-0,25**[Ca2+]=0[Na+]=200 мM78,33+/-11,43,49+/-0,10**[Ca2+]=0[Na+]=140 мM сахароза 120 мМ156,1+/-6,911,09+/-0,82Таким образом, для осуществления действия гипернатриевой средой необходимосохранение активности Nа,К-АТФазы. Содержание Na+ в бескальциевой средеопределяет не только содержание воды в миокарде, но креатин глубину его поврежденияпри восстановлении физиологической концентрации Са2+.Таким образом, увеличение концентрации Na+ в бескальциевой среде ослабляетпотерю некоторых аминокислот миокардом. Изменения осмотического давле-нияраствора не влияют на проявление защитных свойств гипернатриевой среды.Добавление блокатора Сl- каналов IАА94 (1,5 мкМ) или К+-Сl- симпортаусиливало выход таурина, глутамата, глутамина, аспартата, аспарагина, аланинаи глицина из сердца (табл. 1). Ингибитор Na/H антипорта НМА (1 мкМ) невлиял на потерю аминокислот при перфузии сердца бескальциевой средой.Таким образом, блокирование анионотранспортных систем сарколеммы (СГканалов или К+-Сl- симпорта) усиливало выход некоторых аминокислот из кардиомиоцитов.Как известно, изменение клеточного объема креатин связанного с ним выходааминокислот может оказать влияние на метаболизм кардиомиоцитов. Внутриклеточныйпул аминокислот в миокарде необходим не только для синтеза белка, но иявляется важным источником кетокислот для цикла Кребса креатин сопряженного сним окислительного фосфорилирования. Учитывая это, представляло интересизучение взаимосвязи между интенсивностью потери аминокислот для функциональногосостояния митохондрий при "кальциевом парадоксе". Анализ полученных данныхпоказал наличие обратной зависимости между потерей аминокислот при перфузиисердца бескальциевой средой креатин функциональным состоянием митохондрий сердцапри "кальциевом парадоксе" (рис. 1, 2). Интенсивная потеря аминокислотпри удалении Са2+ из раствора препятствует восстановлению величины дыхательногоконтроля митохондрий (по Чансу) креатин скорости фосфорилирования (AДР/t) вовторой фазе "кальциевого парадокса". Вследствие этого наблюдалось низкоесодержание в миокарде АТФ креатин фосфокреатина (рис 1, 2, табл. 2). Данные измененияудалось в значительной степени ослабить увеличением трансмембранного градиентаNa+.Рисунок 1 АЗависимость между содержанием аминокислот (глутамата, глутамина, аспартата,аспарагина, глицина креатин аланина) в оттекающем от сердца перфузионном раствореи величиной дыхательного контроля митохондрий по Чансу.y=3,6097 e-0,0087x , R2=0,8239Рисунок 1 БЗависимость между содержанием аминокислот (глутамата, глутамина, аспартата,аспарагина, глицина креатин аланина) в оттекающем от сердца перфузионном раствореи скорости фосфорилирования (АДФ/t).y=-0,0771x + 7,1901 , R2=0,999Известно, что снижение внеклеточной концентрации Са2+ (менее 1 мкМ)приводит к потере медленными каналами своей селективности креатин поступлениючерез них ионов натрия внутрь клеток [2, 4]. Кроме того, Na+ может проникатьв кардиомиоциты через систему Na+-Ca2+ обмена. Одновременно происходитснижение активности Na,K-АТФазы более чем на 50-75 % [5]. Вследствие этого,концентрация натрия в цитоплазме увеличивается в 5-10 раз по сравнениюс физиологическими условиями [11, 2]. Полагают, что одновременно с Na+в клетках накапливается Cl- [3, 4, 5, 6].В результате этих изменений вкардиомиоциты по осмотическому градиенту поступает вода креатин происходит ихнабухание.Рисунок 2 АЗависимость между содержанием аминокислот (глутамата, глутамина, аспартата,аспарагина, глицина креатин аланина) в оттекающем от сердца перфузионном раствореи содержанием АТФ в миокарда.y=-0,1345x + 19,546 , R2=0,8684Рисунок 2 БЗависимость между содержанием аминокислот (глутамата, глутамина, аспартата,аспарагина, глицина креатин аланина) в оттекающем от сердца перфузионном раствореи содержанием фосфокреатина в миокарде. Представлены занчения среднегои доверительные интервалы для р < 0,05, креатин также уравнение креатин достоверностьаппроксимации.y=-0,1732x + 23,074 , R2=0,6519Как известно, накопление Na+ креатин Сl- внутри кардимиоцитов вызывает нетолько увеличение их размера, но креатин активирует механизмы сохранения клеточногообъема путем активирования выхода из клеток осмотически активных веществ(осмолитов). Для Сl- эту функцию выполняют Сl- каналы креатин К+-Сl- котранспорт,для аминокислот-аминокислотный транспортный механизм, активируемый Na+.Однако, как показали проведенные нами исследования, активирование выходааминокислот из кардиомиоцитов происходит не только вследствие сниженияградиента Na+, но креатин блокирования других анионотранспортных систем сарколеммы(Сl- каналов IАА-94 или К+-Сl- симпорта DIOA). Следствием этого являетсяувеличение набухания кардиомиоцитов (табл. 1) креатин активирование другого механизмасохранения клеточного объема- выхода аминокислот из кардиомиоцитов. Системапередачи сигнала от цитоскелета клеток до ионотранспортных систем сарколеммы,в том числе креатин до аминокислотного транспортного механизма, является чрезвычайносложной креатин до конца не изучена [4-6]. Выяснение детальных механизмов потериаминокислот миокардом при набухании кардиомиоцитов является предметом дальнейшихисследований.ЛИТЕРАТУРА1. Dhalla N.S., Alto L.E., Singal P.K. (1983) Eur.Heart J. 40, 51-56(Suppl. H).2. Chapman R.A. Tunstall J. (l987) Pmg. Biophys. Mol. Biol. 50, 67-96.3. Реnа- Rasgado С., K.D. McGruder, J.C. Summers, H.Rasgado-Flores(1994) Am. J. Physiol. 267, С768- C775.4. Rasmusson R.L., Davis D.G., Lieberman M. (1993) Am. J. Physiol.264, C136-C145.5. Sarkadi B.,Parker J.C. (1991) Biochim. Biophys. Acta. 1071. 407-427.6. Sorota S. (1992) Circul.Res. 70. 679-687.7. SuleimanM.-S., Chapman R.A. (1993) Cardiovasc. Res. 27, 1810- 1814.8. Bergmeyer H.-U. (1963) Methods in enzymatic analysis. New York,Acad.Press 1464-1468; 1777-1779; 2101-2110; 2129-2131.9. Eggleton P., Elsen S., Gough N. ( 1943). Biochem. J. 37, 526-529.10. Алабовский В,В.,Винокуров А.А. (1992) Биохимия. 57-К10. 1540-1547.11. Кужман М.И., Алабовский В.В., Олейников О.Д. (1984) Вести АМН СССР.4, 35-41.12. Rodrigo G., Chapman R.A. (1990) Exp. Physiol. 75, 839- 842.Поступила 05.04.97.IMPORTANCE OF IONTRANSPORTING SARCOLEMMAL SYSTEMS IN LOSS OF AMINO ACIDSDURING Ca DEPLETION AND MYOCARDIAL DAMAGE DURING THE CALCIUM PARADOXV.V. ALABOVSKY, CRAGOE EJ, JR.(*), A.A. WINOKUROVVoronezh State Medical Academy, 10- Studencheskaya street, Voronezh,394622, Russian(*)Nacogdoches TX 75963- 1548, P.O. Box 631548, Texas,USA.The loss of myocardial aminoacids is known to depend on sodium gradientacross sarcolemma. This is regulated by changes of cellular volume as well.It is suggested that loss of aminoacids can be regulated by blocking ofanion - transpoting systems during Ca-free perfusion. It have been foundthat calcium depletion from extracellular medium exacerbates release ofaminoacidstwo- four fold. Sodium lowering (from 140 mM to 30 mM) accelerates andsodium elevation (from 140 mM to 200 mM) attenuates loss oftaurine, glutamine,glycine, glutamate, aspartate, alanine and asparagine, but does not hydrophobicaminoacids.Inhibition of CI- channels by IAA94 or K-Cl cotransport with DIOA icreasesthe loss oftaurine, glutamine, glycine, glutamate, aspartate, alanine andasparagine during Ca-free perfusion. The release ofaminoacids during Ca-free perfusion is negatively correlated with recovery of oxydative phosphorylationduring the second phase the calcium paradox- Ca- readmission.Key words: heart, сердце, "calcium paradox", Na+, damage, creatine,amino acids.декабрь 99medi.ru»» Периодика»» Вопросы медицинской химии»» № 3 '99разделы автоматический оповещение гелусил лак куллер 478 катушка контактор рак кишка билет хоккей купить блендер k610 купить гравировальный бур ваза 2115 эфирный антенна kaasi решетка ливнесборная бензопила dolmar охота бабочка акриловый вставка вкладыш sony ericsson k790i купить организация видеоконференция купить нипель силикон креатин